冠心平片含药血清对H2O2诱导人血管内皮细胞凋亡及NF-kB蛋白表达的影响

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目的 探讨冠心平片含药血清抗H2O2诱导血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)凋亡作用及对核因子-kB( nuclear factor kappa B,NF-kB)蛋白表达的影响.方法 将大白兔随机分为正常组(生理盐水,10 mL/kg)、维拉帕米组(0.02 g/kg,10 mL/kg)、冠心平小剂量组(2.8g/kg,10 mL/kg)、冠心平中剂量组(5.6 g/kg,10 mL/kg)、冠心平大剂量组(11.2 g/kg,10 mL/kg),每组3只.灌胃给药,连续3天,最后1天灌胃2次,间隔2h,末次给药后1h,耳缘静脉采血,放置1h,2 500 r/min离心30 min,吸取血清,56℃、30 min灭活,制备含药血清.采用100 μmol/L H2O2作用于对数生长期的VEC建立细胞凋亡损伤模型.造模后分为6组,每组5个样本:正常组(10%空白血清培养液)、模型组(10%空白血清培养液+100 μmol/LH2O2)、维拉帕米组(10%维拉帕米血清培养液+100 μmol/L H2O2)、冠心平低剂量组(10%低剂量冠心平血清培养液+ 100 μmol/L H2O2)、冠心平中剂量组(10%中剂量冠心平血清培养液+100 μmol/L H2O2)、冠心平高剂量组(10%高剂量冠心平血清培养液+100 μmol/L H2O2).采用流式细胞术检测VEC凋亡率,采用Western blot检测NF-kB蛋白表达.结果 模型组VEC凋亡率(9.00%±1.18%)、NF-kB蛋白表达(0.39%±0.06%)较正常组升高(P<0.01);与模型组比较,维拉帕米组(6.00%±0.18%)及冠心平高剂量组(5.30%±0.08%)、中剂量组(6.83% ±0.51%)VEC凋亡率明显降低,各给药组NF-kB蛋白表达显著降低(维拉帕米组:0.28%±0.03%,冠心平低剂量组:0.33%±0.03%,冠心平中剂量组:0.30%±0.03%,冠心平高剂量组:0.28%±0.04%,P<0.01,P<0.05).结论 冠心平片可以拮抗H2O2诱导VEC的凋亡效应,其机制可能与调节NF-kB有关.
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