【摘 要】
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目的 以1例稀有的O型D--献血者外周血单个核细胞为实验对象，制备分泌Rh血型系统单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 无菌分离外周血白细胞，经淋巴细胞分离液分离得到单个核细胞（PBMCs）,利用B95-8培养上清中的EB病毒（EBV）,转化PBMCs中的B淋巴细胞使其母细胞化。血清学筛选分泌特异性抗体的单一B细胞克隆并扩大培养，与SHM-D33瘤细胞在电刺激下融合，经含有次黄嘌呤（Hypoxantin
【基金项目】
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上海市卫生健康委员会科研课题面上项目（202040501）；
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目的 以1例稀有的O型D--献血者外周血单个核细胞为实验对象，制备分泌Rh血型系统单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法 无菌分离外周血白细胞，经淋巴细胞分离液分离得到单个核细胞（PBMCs）,利用B95-8培养上清中的EB病毒（EBV）,转化PBMCs中的B淋巴细胞使其母细胞化。血清学筛选分泌特异性抗体的单一B细胞克隆并扩大培养，与SHM-D33瘤细胞在电刺激下融合，经含有次黄嘌呤（Hypoxantine, H）、氨基蝶呤（Aminopterin, A）、胸腺嘧啶核苷（Thymidine, T）、脱氧胞嘧啶核苷（2-Deoxycytide, D）、毒毛旋花苷（Ouabain, O）的培养基，即HOTD（HATD+Ouabain）选择性培养、微量板抗体筛选以及有限稀释亚克隆，建立分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株，血清学和流式细胞试验鉴定抗体特异性。结果 从D--外周血转化B淋巴细胞培养上清中，初筛得到与R1R1（DCe/DCe） O型红细胞凝集，与R2R2（DcE/DcE）O型红细胞不凝集的单个细胞克隆3A6-C6,初步鉴定抗体特异性为抗-C,与SHM-D33骨髓瘤细胞杂交后建立了持续稳定分泌IgM抗-C的杂交瘤细胞株。结论 本研究从外周血B细胞开始构建单克隆杂交瘤细胞株，为Rh血型系统血清学单克隆试剂的研发和改造奠定了基础。
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