【摘 要】
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应用分子生物学方法将人β-内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312-AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒/腺相关杂合病毒Ad/AAV-EE.用PCR
【机 构】
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第二军医大学东方肝胆外科医院麻醉科,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒基因治疗实验室
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应用分子生物学方法将人β-内啡肽融合基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC312-AAVEE,后者与骨架质粒共转染HEK293细胞,包装得到含转基因腺病毒/腺相关杂合病毒Ad/AAV-EE.用PCR方法对杂合病毒进行鉴定,TCID50法测定病毒滴度.杂合病毒感染体外培养细胞观察转基因表达,ELISA法测定培养液中表达产物浓度.PCR法证实转基因正确插入了杂合病毒基因组内,且没有野生型病毒污染,病毒滴度为1.29×1010PFU/mL.结果表明转基因从第1天到第14天的表达水平呈上升趋势,第14天达到
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