【摘 要】
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以一株副溶血弧菌作为研究对象,比较了MTT比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法这3种方法在活细菌高通量计数上的应用效果。用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定
【机 构】
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上海海洋大学水产与生命学院,中国水产科学研究院黄海水产研究所
【基金项目】
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中国东盟海上合作基金项目(2016~2018);现代农业产业技术体系(CARS-48);中国水产科学研究院基本科研业务费专项(2017HY-ZD10)共同资助
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以一株副溶血弧菌作为研究对象,比较了MTT比色法、ATP生物发光法和高通量生长曲线法这3种方法在活细菌高通量计数上的应用效果。用96孔培养板进行不同浓度细菌活菌计数,确定了3种方法在副溶血弧菌活菌计数的标准曲线和线性范围。结果显示,副溶血弧菌的MTT比色法以DMSO溶解的MTT产物甲瓒在555nm的吸光度(OD555)为计数依据,活菌数的对数[Log（C）]与Log(OD555)线性关系的标准曲线为Log（C）=（1.0439±0.0200）Log(OD555)+（8.0565±0.0125）,相关系数R2=0.9965,线性检测范围是7.8×106～2.5×108 cfu/m L;ATP生物发光法以ATP产生的相对发光值（RLU）为计数依据,Log（C）与Log（RUL）线性关系的标准曲线为Log（C）=（0.9590±0.0065）Log（RLU）+（0.9949±0.0366）,相关系数R2=0.9994,线性检测范围是1.0×104～3.0×108 cfu/m L;高通量生长曲线法以生长曲线达到拐点的时间（Ts）为计数依据,Log（C）与Ts线性关系的标准曲线为Log（C）=-（0.8727±0.0230）Ts+（9.0128±0.1572）,相关系数R2=0.9924,线性检测范围是1.0×100～1.0×107 cfu/m L。用3种方法对实际菌液测量并与平板计数法比较表明,ATP生物发光法与高通量生长曲线法有很好的准确性,MTT比色法准确度稍差;而高通量生长曲线法有最宽的线性范围,也最合适高通量测定。
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