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根据GenBank中的猪圆环病毒2型（PCV2）ORF4基因序列设计一对特异性引物，通过常规PCR扩增PCV2的ORF4基因，并将其纯化的PCR产物克隆入pMD18-T载体中，构建重组质粒。应用该重组质粒进行EvaGreen实时荧光定量PCR，建立了PCV2 DNA的标准曲线，并进行熔解曲线分析。结果显示：建立的EvaGreen实时荧光定量PCR特异性强，与其他非靶标病毒基因不发生交叉反应；灵敏度高，最高可检测到10拷贝/μL的病毒量；重复性好，3个浓度的批间和批内的变异系数均小于2.5%；对118份临床