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研究A20基因、血红素加氧酶1基因(heme oxygenase 1 gene，HO－1)转染在大鼠胰岛细胞中的表达情况及对体外培养条件下胰岛活性、拮抗放线菌酮(CHX)和肿瘤坏死因子－α(TNF－α)诱导的胰岛细胞凋亡作用的影响。
方法构建A20、HO－1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)慢病毒转移载体，荧光显微镜连续观察EGFP表达情况，评估转基因效率、确定诱导凋亡时机。Western印迹测定A20和HO－1蛋白表达。超敏ELISA试剂盒检测胰岛素浓度。胰岛经CHX＋TNF－α处理48 h进行TUNEL、流式细胞仪检测凋亡率。Western印迹检测半胱氨酸蛋白酶－3的活化。
结果(1)分别以A20和HO－1慢病毒转染胰岛检测表明A20和HO－1蛋白均呈高表达。(2)胰岛细胞经培养48 h和96 h，转基因各组胰岛素浓度高于空白对照组(P<0.01)。(3)CHX＋TNF－α诱导胰岛细胞凋亡后，转A20组胰岛素浓度为(93.58±4.12)μg/ml、转HO－1组胰岛素浓度为(88.98±4.77)μg/ml，联合转A20和HO－1组胰岛素浓度(103.33±3.16)μg/ml，均高于转EGFP组[(9.03±0.65)μg/ml ]和空白对照组[(8.86±0.38)μg/ml，P<0.001]。Western印迹法检测显示联合转A20/HO－1基因组活化型半胱氨酸蛋白酶－3表达水平最低。
结论原代胰岛细胞中高效表达的A20和HO－1蛋白具有抗CHX＋TNF－α诱导的胰岛凋亡作用，联合转A20和HO－1基因有协同抗凋亡效应。