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摘要：采用高压液相色谱测定食品添加剂IMP、GMP（以下简称I+G）与国标法测定I+G具有精密度高，处理简单，方便快速等特点。该检测方法最低检出量为1μg标准物，对于样品的色谱定量分析时，最低检出浓度为0.100g/kg，具有适用范围广的特点。
关键词：液相色谱 I+G 食品添加剂 IMP GMP 呈味核
苷酸二钠
1 概述
呈味核昔酸二钠（IMP+GMP）是新一代的核昔酸类食品增鲜剂。IMP和GMP直接加入到食品中，起增鲜作用，因此在食品行业应用广泛。国家标准测定I+G含量是用紫外分光光度法，此法适用于纯度高，含杂质较小的样品[1]。杂质会对其检测产生较大的影响。本文建立的高效液相色谱法测定IMP和GMP的含量的方法，操作简单，灵敏度高，重复性好。对于大批量样品的检测和成分复杂样品的检测同样适用。
2 实验仪器与试剂
2.1 实验仪器
高效液相色谱仪（带四元泵、紫外检测器）（Agilent
1200）；AT-930柱恒温箱（天津奥特塞恩斯）；旋转蒸发仪（德祥科技有限公司）；纯水机（重庆利迪）；离心机（上海安亭）；电子天平（千分之一）（A&D）；电子天平（十万分之一）（A&D）
50ml小烧杯、5.00ml移液管，50ml容量瓶，100ml容量瓶，50ml离心管。
2.2 试剂
0.5%磷酸二氢钠（现配现用）；甲醇（色谱纯）；75%甲醇-水溶液（按照体积3：1配置）；IMP、GMP标准品（sigma 公司）纯度≥99.0%。
IMP、GMP标准贮备液[c（IMP、GMP）=1.00mg/mL]：准确称取色谱级IMP、GMP标准品各0.1000g，用水溶解并定容至100mL。
IMP、GMP标准使用液：吸取适量IMP、GMP标准贮备液，用水稀释成每毫升相当于5，10，100，200，500 mg IMP及5，10，100，200，500mg GMP。
2.3 实验材料 随机从市场上购买酱油、鸡精、鸡粉、酱
3 实验方法
3.1 样品前处理（参考GB 5009.12[2]）
3.1.1 常规三类样品处理方法
①食品添加剂IMP、GMP、IMP+GMP
用千分之一电子天平准确称取1.000g样品于小烧杯中，先加少量水使其溶解后用水完全转移入100mL容量瓶中，多次润洗小烧杯，一同转移到容量瓶中并定容至刻度，摇震容量瓶一分钟，使之混合均匀。用移液管准确吸取该稀释液5.00mL，转移至50mL容量瓶中并定容至刻度，摇均。用0.22μm微孔膜过滤，滤液备用。
②鸡精
用千分之一电子天平准确称取1.000g样品于小烧杯中，先加少量水使其溶解，用水转移入100mL容量瓶中，多次润洗小烧杯，一同转移到容量瓶中并定容至刻度，摇震容量瓶一分钟，使之混合均匀。用0.22μm微孔膜过滤，滤液备用。
③酱油、调味汁
用千分之一电子天平准确称取5.000g试样，用75%甲醇溶液定容至50mL，摇匀，静置30min，取20-30ml醇沉液于50ml离心管中，2000r/min离心5min，用移液管吸取10.00mL上清液于浓缩瓶中，于45℃水浴条件下浓缩至2ml左右，用水将剩余溶液完全转移入10mL容量瓶并用水定容至刻度，经0.22μm滤膜过滤，滤液备用。
3.1.2 其他类样品处理方法
与①、②、③相同或相似体态的其他样品可参照上述处理方法进行。不同于上述几类样品体态的其他样品应另行确定样品的处理方法。
3.2 测定
3.2.1 仪器条件
色谱柱：Phenomenex SAX色谱柱，4.0×250mm，粒径5μm
流动相：0.5%磷酸二氢钠，流速为1.000ml/min，等梯度洗脱
柱温：25℃
波长：254nm
运行时间：10min
3.2.2 测定
进样20μL标准系列中各浓度标准使用液于液相色谱仪中，可测得不同浓度IMP、GMP的峰面积，以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，作一标准曲线。
同时进样20μL样品溶液，测得峰面积与标准曲线比较定量。
3.2.3 试样中IMP、GMP的含量计算
试样中IMP、GMP的含量按下式计算：
式中：X——试样中IMP、GMP含量，单位为克每千克（mg/kg）。
A——进样体积中IMP、GMP的质量，单位为毫克（mg）。
V2——进样体积，单位为毫升（mL）。
V1——试样稀释液总体积，单位为克（g）。
m——试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
4 实验图谱处理及分析总结
4.1 实验图谱处理
实验按照上述方法，制定了标准曲线，在标样稳定、复合回收要求的情况下测量了鸡精、鸡粉、酱油等样品的I+G含量。
逐级稀释GMP和IMP标准液进行HPLC分析。
GMP的线性回归方程为Y=34204.23X（R=0.9999736），线性范围为1～500mg/L，检测限为1mg/kg，标准曲线见图1。
IMP的线性回归方程为Y=26838.3X（R=0.9999905），线性范围为1～500mg/L，检测限为1mg/kg，标准曲线见图2。 4.3 总结
由图1、图2可知，在高压液相色谱上的GMP和IMP相关系数都达到了0.9999以上，说明相关度高。测得的数据可靠性较高。
通过图3中标样的测定值可以看出，回收率已经达到了1.000，表明实验的可重复性是非常高的，系统的稳定性足以满足实验条件。并且我们通过多次重复实验也证明了这一点。
图4和图5中，鸡精和鸡粉是含有其它成分相对较少的样品。通过图谱可以看出，IMP和GMP的峰型都很好，都能够非常清晰的得知样品中的I+G含量。
在图6和图7中，虽然杂峰较多，但是也不失稳定性，其测得结果也是可靠的。实际的平行样中，最终结果也是相对稳定的，能够满足日常工作需要。
从实验数据可知，用液相色谱法测定调味品中的I+G结果重现性高，测定数据稳定，测定时间短，能够满足大批量样品的测定，提高了劳动效率。
5 项目成功及未来的工作
本实验确定了一个可靠的测定调味剂中I+G的方法，能够较准确地GMP和IMP的含量。具有时间短，可靠性高，适用性广的特点。很多调味剂中添加了I+G，在接下来的研究工作中，将会对不同品牌的相同品种中做深入地研究，也会对不同GMP、IMP含量之比的产品中做出感官评价和质量报告。
参考文献：
[1]郑胜彪，唐靖.紫外分光光度法同时测定鸡精谷氨酸钠和呈味核昔酸《中国调味品》2009年第五期.
[2]宇辰.星湖生物科技股份有限公司I+G鲜味剂达到国际先进水平《中国食品添加剂》2005 年第2期.
[3]凌关庭.食品添加剂手册（上、下）.1999.
[4]管有根，周侃，顾秀英.鸡精中呈味核昔酸的测定（The deter-
mination of the I+G in granulated chicken）《中国调味品》2005年第二期.
[5]双波长分光光度法测定呈味核昔酸二钠混合物含量《食品
与发酵工业》.
[6]欧雅利.《测定食品添加剂I+G含量》，《中国食品安全高峰
论坛论文集》.
作者简介：安彩华（1969-），女，广东佛山人，工程师，就职于佛山市质量计量监督检测中心，从事食品检验工作。
关键词：液相色谱 I+G 食品添加剂 IMP GMP 呈味核
苷酸二钠
1 概述
呈味核昔酸二钠（IMP+GMP）是新一代的核昔酸类食品增鲜剂。IMP和GMP直接加入到食品中，起增鲜作用，因此在食品行业应用广泛。国家标准测定I+G含量是用紫外分光光度法，此法适用于纯度高，含杂质较小的样品[1]。杂质会对其检测产生较大的影响。本文建立的高效液相色谱法测定IMP和GMP的含量的方法，操作简单，灵敏度高，重复性好。对于大批量样品的检测和成分复杂样品的检测同样适用。
2 实验仪器与试剂
2.1 实验仪器
高效液相色谱仪（带四元泵、紫外检测器）（Agilent
1200）；AT-930柱恒温箱（天津奥特塞恩斯）；旋转蒸发仪（德祥科技有限公司）；纯水机（重庆利迪）；离心机（上海安亭）；电子天平（千分之一）（A&D）；电子天平（十万分之一）（A&D）
50ml小烧杯、5.00ml移液管，50ml容量瓶，100ml容量瓶，50ml离心管。
2.2 试剂
0.5%磷酸二氢钠（现配现用）；甲醇（色谱纯）；75%甲醇-水溶液（按照体积3：1配置）；IMP、GMP标准品（sigma 公司）纯度≥99.0%。
IMP、GMP标准贮备液[c（IMP、GMP）=1.00mg/mL]：准确称取色谱级IMP、GMP标准品各0.1000g，用水溶解并定容至100mL。
IMP、GMP标准使用液：吸取适量IMP、GMP标准贮备液，用水稀释成每毫升相当于5，10，100，200，500 mg IMP及5，10，100，200，500mg GMP。
2.3 实验材料 随机从市场上购买酱油、鸡精、鸡粉、酱
3 实验方法
3.1 样品前处理（参考GB 5009.12[2]）
3.1.1 常规三类样品处理方法
①食品添加剂IMP、GMP、IMP+GMP
用千分之一电子天平准确称取1.000g样品于小烧杯中，先加少量水使其溶解后用水完全转移入100mL容量瓶中，多次润洗小烧杯，一同转移到容量瓶中并定容至刻度，摇震容量瓶一分钟，使之混合均匀。用移液管准确吸取该稀释液5.00mL，转移至50mL容量瓶中并定容至刻度，摇均。用0.22μm微孔膜过滤，滤液备用。
②鸡精
用千分之一电子天平准确称取1.000g样品于小烧杯中，先加少量水使其溶解，用水转移入100mL容量瓶中，多次润洗小烧杯，一同转移到容量瓶中并定容至刻度，摇震容量瓶一分钟，使之混合均匀。用0.22μm微孔膜过滤，滤液备用。
③酱油、调味汁
用千分之一电子天平准确称取5.000g试样，用75%甲醇溶液定容至50mL，摇匀，静置30min，取20-30ml醇沉液于50ml离心管中，2000r/min离心5min，用移液管吸取10.00mL上清液于浓缩瓶中，于45℃水浴条件下浓缩至2ml左右，用水将剩余溶液完全转移入10mL容量瓶并用水定容至刻度，经0.22μm滤膜过滤，滤液备用。
3.1.2 其他类样品处理方法
与①、②、③相同或相似体态的其他样品可参照上述处理方法进行。不同于上述几类样品体态的其他样品应另行确定样品的处理方法。
3.2 测定
3.2.1 仪器条件
色谱柱：Phenomenex SAX色谱柱，4.0×250mm，粒径5μm
流动相：0.5%磷酸二氢钠，流速为1.000ml/min，等梯度洗脱
柱温：25℃
波长：254nm
运行时间：10min
3.2.2 测定
进样20μL标准系列中各浓度标准使用液于液相色谱仪中，可测得不同浓度IMP、GMP的峰面积，以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标，作一标准曲线。
同时进样20μL样品溶液，测得峰面积与标准曲线比较定量。
3.2.3 试样中IMP、GMP的含量计算
试样中IMP、GMP的含量按下式计算：
式中：X——试样中IMP、GMP含量，单位为克每千克（mg/kg）。
A——进样体积中IMP、GMP的质量，单位为毫克（mg）。
V2——进样体积，单位为毫升（mL）。
V1——试样稀释液总体积，单位为克（g）。
m——试样质量，单位为克（g）。
计算结果保留两位有效数字。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
4 实验图谱处理及分析总结
4.1 实验图谱处理
实验按照上述方法，制定了标准曲线，在标样稳定、复合回收要求的情况下测量了鸡精、鸡粉、酱油等样品的I+G含量。
逐级稀释GMP和IMP标准液进行HPLC分析。
GMP的线性回归方程为Y=34204.23X（R=0.9999736），线性范围为1～500mg/L，检测限为1mg/kg，标准曲线见图1。
IMP的线性回归方程为Y=26838.3X（R=0.9999905），线性范围为1～500mg/L，检测限为1mg/kg，标准曲线见图2。 4.3 总结
由图1、图2可知，在高压液相色谱上的GMP和IMP相关系数都达到了0.9999以上，说明相关度高。测得的数据可靠性较高。
通过图3中标样的测定值可以看出，回收率已经达到了1.000，表明实验的可重复性是非常高的，系统的稳定性足以满足实验条件。并且我们通过多次重复实验也证明了这一点。
图4和图5中，鸡精和鸡粉是含有其它成分相对较少的样品。通过图谱可以看出，IMP和GMP的峰型都很好，都能够非常清晰的得知样品中的I+G含量。
在图6和图7中，虽然杂峰较多，但是也不失稳定性，其测得结果也是可靠的。实际的平行样中，最终结果也是相对稳定的，能够满足日常工作需要。
从实验数据可知，用液相色谱法测定调味品中的I+G结果重现性高，测定数据稳定，测定时间短，能够满足大批量样品的测定，提高了劳动效率。
5 项目成功及未来的工作
本实验确定了一个可靠的测定调味剂中I+G的方法，能够较准确地GMP和IMP的含量。具有时间短，可靠性高，适用性广的特点。很多调味剂中添加了I+G，在接下来的研究工作中，将会对不同品牌的相同品种中做深入地研究，也会对不同GMP、IMP含量之比的产品中做出感官评价和质量报告。
参考文献：
[1]郑胜彪，唐靖.紫外分光光度法同时测定鸡精谷氨酸钠和呈味核昔酸《中国调味品》2009年第五期.
[2]宇辰.星湖生物科技股份有限公司I+G鲜味剂达到国际先进水平《中国食品添加剂》2005 年第2期.
[3]凌关庭.食品添加剂手册（上、下）.1999.
[4]管有根，周侃，顾秀英.鸡精中呈味核昔酸的测定（The deter-
mination of the I+G in granulated chicken）《中国调味品》2005年第二期.
[5]双波长分光光度法测定呈味核昔酸二钠混合物含量《食品
与发酵工业》.
[6]欧雅利.《测定食品添加剂I+G含量》，《中国食品安全高峰
论坛论文集》.
作者简介：安彩华（1969-），女，广东佛山人，工程师，就职于佛山市质量计量监督检测中心，从事食品检验工作。