论文部分内容阅读
目的构建人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库.方法从人大肠癌组织中提取总RNA,RT-PCR反转录合成cDNA第1链,用长距离PCR技术合成cDNA第2链,除去小于500 bp的小片段后与λTriplEx2噬菌体连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库.转染E.coli XL1-Blue大肠杆菌,滴定文库的滴度,确定文库容量大小,测定重组率.用EX TagTM酶做PCR和SfiⅠ酶切鉴定插入的cDNA片段大小.结果构建成含2.39×106 pfu/ml重组子的人大肠癌cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%.插入的外源cDNA片段大小为500 bp～4kb,平均长约1.4kb.结论成功构建高质量人源性大肠癌cDNA噬菌体表达文库,适合于免疫筛选cDNA克隆的人大肠癌相关抗原基因.