【摘 要】
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溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌 ,利用此特性 ,构建温度敏感的内源裂解系统 ,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒 pSC lys
【机 构】
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中国科学院上海生命科学研究院上海生物工程研究中心!上海200233; 中国科学院上海?;
【基金项目】
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国家高技术“863”计划资助项目!No .10 2 11 0 2 0 1&&
论文部分内容阅读
溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌 ,利用此特性 ,构建温度敏感的内源裂解系统 ,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒 pSC lys(pSC10 1复制子 )和p15A lys(p15A复制子 ) ,质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统 ,该系统可以与高拷贝复制子 (如 pMB1,ColE1)的重组蛋白表达质粒兼容。结果表明 ,裂解系统的最适裂解条件由三个要素构成 :pSC lys 工程菌、2～ 5倍浓缩培养物、裂解缓冲液 (2mmol/LEDTA ,5 0mmol/LTris HCl,pH 8.0 )。在最适裂解条件下 ,胞液 β 半乳糖苷酶 ,重组蛋白分子伴侣GroEL及ZZ融合鲑鱼降钙素六聚体均能简单、迅速、定量地释放到裂解液上清 ,两种重组蛋白的表达量均能维持原来的表达水平。此系统可以代替传统的菌体裂解方法 ,在重组蛋白纯化前的回收方面具有较大的应用价值。
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