【摘 要】
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通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了Not
【机 构】
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河南农业大学,郑州牧业高等专科学校
【基金项目】
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河南杰出人才创新基金资助项目(0621002000);规模化养猪重大疫病基因工程疫苗及配套ELISA试剂盒研制
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通过酶切、补平、连接的方法对PUSK载体质粒进行改造,消除了该载体上的BamHⅠ和HindⅢ两酶切位点。根据pAcGFP1-C1基因序列设计1对引物,分别在上、下游引物的5′端引入了NotⅠ酶切位点,通过PCR扩增将目的基因AcGFP(包括GFP、CMV、MCS、SV40 Poly(A))克隆入经改造的PUSK载体内,构建了转移载体质粒PUSG。利用脂质体介导的方法,将转移载体质粒PUSG与伪狂犬病病毒基因组DNA共转染PK-15细胞。于荧光显微镜下48 h便能观察到绿色荧光,用吸管将有荧光的病变细胞吸出
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