目的:建立超高效液相色谱法同时测定二仙汤中淫羊藿主要黄酮类成分的检测方法。方法:采用ZORBAX Eclipse Plus-C18色谱柱（3.0 mm×150 mm,3.5μm）;以体积分数0.1%甲酸和浓度5 mmol·L^-1乙酸铵水溶液（A相）和甲醇（B相）为流动相进行线性梯度洗脱;梯度洗脱程序:0.0⁰.5 min,A相的比例保持95%,0.5¹.5 min,A相的比例由95%降到70%,1.5³.5 min,A相的比例由70%降到50%,3.5⁶.0 min,A相的比例由50%降到30%,6¹2 min,A相的比例由30%降到10%,12¹5 min,A相的比例由10%降到5%;流速为0.45 mL·min^-1;进样量:1μl;柱温:40℃;检测波长为270 nm。测定对照品混合液、二仙汤水提取液和体积分数50%乙醇提取液中朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷以及淫羊藿次苷Ⅱ的含量。结果:超高效液相色谱法检测朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷以及淫羊藿次苷Ⅱ的日间精密度RSD为0.21%⁰.40%,日内精密度RSD为0.54%⁰.89%,稳定性RSD为0.26%⁰.90%,回收率为104.8%¹16.7%。同一提取剂的二仙汤提取液中,不同主要黄酮类成分存在明显的差异,表现为朝藿定C>淫羊藿苷>朝藿定B>淫羊藿次苷Ⅱ含量;二仙汤体积分数50%乙醇提取液中检测的主要黄酮类成分均显著高于二仙汤水提取液,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论:超高效液相色谱法具有十分良好的精密度、稳定性以及回收率,符合方法学的要求,可用于二仙汤中淫羊藿主要黄酮类成分的含量测定,为二仙汤的质量控制提供依据。