【摘 要】
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根据视黄醇结合蛋白(RBP)晶体结构和计算机模拟对拟突变位点所作出的结构预测,筛选出2个可能对RBP结合能力有影响的氨基酸位点.利用定点突变技术分别将35位亮氨酸突变为能引
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根据视黄醇结合蛋白(RBP)晶体结构和计算机模拟对拟突变位点所作出的结构预测,筛选出2个可能对RBP结合能力有影响的氨基酸位点.利用定点突变技术分别将35位亮氨酸突变为能引入较大构象变化的甘氨酸,将98位谷氨酰胺突变为亲水、带正电的精氨酸.将突变后的Rbp基因转入表达宿主菌获得表达后,对突变体蛋白实现了变性条件下的分离纯化.复性后与视黄醇的荧光增强饱和滴定试验表明,35位突变为甘氨酸后对RBP结合能力没有产生明显的影响,但98位突变为精氨酸后,则显著的提高了与视黄醇的结合能力,说明98位是影响RBP与视黄醇结合和解离的重要位点.
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