叶酸促糖尿病肾病大鼠足微循环改善机制研究

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目的:探讨叶酸对糖尿病肾病大鼠足微循环的改善机制.方法:将25只健康雄性SD大鼠适应性喂养1周后随机分为2组,分别为正常组(5只)和造模组(20只).给模型组大鼠每天喂高脂高糖日粮,正常组喂基础日粮.4周后称量体重,造模大鼠空腹腹腔注射1%的链脲佐菌素溶液(STZ,30mg/kg),正常组注射相等容量的柠檬酸盐缓冲液.喂养2周后,测定正常组与模型组的血糖和胰岛素水平.用基础饲料统一喂养造模后的大鼠和正常组大鼠.模型大鼠随机分为stz组、和低剂量(1.5mg/kg)、中剂量(3mg/kg)、高剂量(5mg/kg)叶酸组进行干预,再检测大鼠鼠尾血糖浓度.各组均在干预灌胃3 d后心脏无菌取血制备血清.在底面积75 cm2的培养瓶中加入完全培养基进行小鼠足细胞培养.将正常组和模型组小鼠足细胞的培养依次分为空白对照组、stz组、正常鼠血清对照组和添加低、中、高剂量叶酸血清组.刺激24 h之后用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF水平,后通过PCR技术检测mRNA中VEGF水平,后用蛋白质印迹法(W B)检测蛋白质VEGF表达水平.结果:在高糖组和正常鼠血清组小鼠足细胞观察到VEGF的阳性表达.添加叶酸的血清组足细胞VEGF在蛋白质和mRNA中的表达比高糖组和正常鼠血清组有所降低,差异具有统计学意义.结论:叶酸能够介导血管内皮因子(VEGF)水平从而改善糖尿病肾病大鼠足的微循环.
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