瓠瓜ISSR—PCR反应体系优化

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利用正交设计L9(3^4),对瓠瓜ISSR—PCR反应体系的4因素(dNTP、71物、Mg^2+、Taq酶)在3水平上进行优化试验,建立适合瓠瓜ISSR—PCR反应体系,结果表明,在25μL反应体系中,含1×PCRbuffer、200μmol·L^-1dNTP、0.5μmol·L^-1引物、2.5mmol·L^-1MgCl2、30ng模板DNA、0.75U的Taq酶为最佳处理;通过PCR梯度测验,瓠瓜ISSR扩增适宜的退火温度比Tm值高2~6℃。
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