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【摘要】 目的 为了探讨常规微生物学检验方法中影响念珠菌检验结果准确性的因素。方法 利用常规方法将16株念珠菌进行分离、培养、鉴定，同时对其中8株念珠菌进行DNA序列分析，确定了念珠菌的分子型别。结果 不同分子型号的念珠菌显色平板初步鉴定结果不一样，科玛嘉显色平板只能对白念珠菌作初步鉴定；利用ATB仪器对念珠菌进行鉴定时，以达到准确的鉴定结果，最好将板条放28e孵育24h，DADE4h快速酵母菌鉴定系统对临床常见酵母菌的鉴定结果与ATB一致；16株念珠菌分子分型结果中只有2株不适合自动化仪器鉴定结果。结论 念珠菌检验结果准确性主要靠培养基、培养温度和时间稳定来完成。
【关键词】 念珠菌；显色平板；影响因素
文章编号：1004-7484（2013）-02-0997-02
近几年，随着我国免疫人群的逐渐增加，各种入侵性诊断与治疗技术也得到了不断地提高，人民对广谱抗菌药物、激素、免疫抑制剂等都广泛地使用，所以，逐渐出现了真菌感染现象，其中念珠菌感染是最为明显的一种细菌感染症状。目前出现念珠菌的病症主要在白血病、缺陷性综合症、器官移植、早产、烧伤等检查标本中会发现念珠菌的存在。[1]到目前为止，我国在治疗念珠菌病毒上还没有规定相关确定的治疗方法，我国卫生部对治疗念珠菌尚未制定相关的可操作性的方法，所以，我国在探讨念珠菌治疗及初步鉴定的程序还在利用显色平板分离进行念珠菌鉴定。[2]但是这种鉴定方法在应用时还要考虑培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响，当指示剂、培养时间、培养温度的不一样时会影响鉴定结果的显示。本次主要抽选16株念珠菌進行标准的分离、培养、鉴定，再对照其中8株念珠菌DNA分子作为对照，从而了解利用这种方法进行鉴定的操作性。[3]
1 资料与方法
1.1 临床资料 材料主要有16株念珠菌分别来自患者的痰、尿、粪、阴道拭子等标本，其中有3株念珠菌，这3株为标准菌株，培养基、显色培养基干粉、科玛嘉显色平板（DIFCO干粉）、沙保弱培养基干粉，DADE鉴定仪，4h快速酵母菌鉴定板，ATB鉴定仪，酵母菌鉴定板。[4]
1.2 方法与观察指标 首先，根据产品的标签要求对念珠菌的培养基准备配置；其次，将念珠菌在最适温度与稳定时间里，将培养基中培养2天时间，再观察念珠菌的生长情况；再次，利用ATB系统进行鉴定，从而将念珠菌在培养基里进行1到2天进行观察生长情况，利用ATB仪器上进行判读鉴定结果显示。[5]
2 结果
2.1 分离培养，对16株临床念珠菌进行分离培养，将16株临床念珠菌在培养基上进行培养，观察它们的生长情况，结果显示：35e的念珠菌优于28e的念珠菌，培养48h的念珠菌优于培养24h念珠菌；不同型号与质量的培养基显色情况也不一样。
2.2 菌株鉴定
首先，采取ATB系统对16株临床念珠菌进行鉴定，可以知道，随着培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响到念珠菌的显色效果，从而影响到菌种的鉴定结果，所以在念珠菌的菌种鉴定中，最好使用相同培养时间、相同培养基、相同的培养温度对16株念珠菌进行鉴定，才能确保对念珠菌的菌种鉴定具有一定的稳定性。
其次，将部分念珠菌用DADE系统4h快速酵母菌鉴定板鉴定，大多数结果与ATB系统48h鉴定结果相同，只有1株不同。
再次，将1株DADE系统和ATB系统鉴定结果不同的念珠菌再次利用DADE系统作鉴定，结果与ATB鉴定结果一致，为邹落念珠菌。
2.3 分子分型 通过Blast程序分析临床分离的16株临床念珠菌的DNA分子类型保守序列特异区测序结果并与Gen Bank中核酸数据比对，得出相同程度最高念珠菌种。
3 讨论
念珠菌是储存在人体的表皮、口腔、肠道等与外界接触的腔道中的一种人体细菌。当人体的抵抗力降低时，念珠菌容易入侵我们人体的腔道，从而发生局部感染现象出现。例如有常见的传染性口角炎、鹅口疮、外耳炎症、脑膜炎、眼部感染、肺部炎症、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、尿道感染、外阴阴道炎、擦烂型念珠菌病、甲沟炎、甲癣、骨髓炎、真菌血症、播散性感染等受感染引起的感染症状。
通过念珠菌鉴定研究发现，对16株临床念珠菌进行显色反应，从而利用沙保弱或显色培养基。当孵育温度高时，念珠菌在培养基的生长状况要好的多，当念珠菌在培养基里培养时间长的念珠菌可以生长得更好。其中有1株临床念珠菌利用ATB和DADE系统鉴定显示为邹落念珠菌，DADE系统鉴定为克柔念珠菌，分子分型为近邹落念珠菌，这说明细胞水平鉴定与分子分型存在差异。
实验结果表明，这种方法比细胞水平方法更能解释DNA分子类型的不同，这种方法对念珠菌的菌种的确定具有一定的稳定性。本研究在对念珠菌的鉴定过程中，其中随着培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响到念珠菌的显色效果，从而影响到菌种的鉴定结果，以及影响菌种的检验结果的准确性。
随着念珠菌感染的常见性、普遍性、复杂性，加强念珠菌微生物学检验结果的快速与准确是如今医学领域的主要解决问题之一，规范检验操作、保证检验结果准确是我们当今医学领域的第一目标。
参考文献
[1] 唐国瑶.口腔念珠菌实验室诊断的进展[J].国外医学口腔医学分册，2009，19（4）：205.
[2] Betty AF，Daniel FS，Alice SW，et al.Bailey& scottcs diagnostic microbiology [M].10th ed.St.Louis：Mosby，2008：940-958.
[3] 李真.侵袭性念珠菌病的实验室诊断研究进展[J].检验医学，2007，22（1）：102-104.
[4] Chen YC，Eisner JD，Kat tar MM，et al.Poly morph I c internal transcribed spacer region 1 DNA sequences identify medically important yeasts [J].JClin Micro bio，2009，39（11）：4042-4051.
[5] Okop Ien B，Bas Iak M，Madej A，et al.Markers of in flam at or y process in stable and unstable coronary artery disease [J].Pol Merkur Lekarsk，2006，21（121）：69-72.
【关键词】 念珠菌；显色平板；影响因素
文章编号：1004-7484（2013）-02-0997-02
近几年，随着我国免疫人群的逐渐增加，各种入侵性诊断与治疗技术也得到了不断地提高，人民对广谱抗菌药物、激素、免疫抑制剂等都广泛地使用，所以，逐渐出现了真菌感染现象，其中念珠菌感染是最为明显的一种细菌感染症状。目前出现念珠菌的病症主要在白血病、缺陷性综合症、器官移植、早产、烧伤等检查标本中会发现念珠菌的存在。[1]到目前为止，我国在治疗念珠菌病毒上还没有规定相关确定的治疗方法，我国卫生部对治疗念珠菌尚未制定相关的可操作性的方法，所以，我国在探讨念珠菌治疗及初步鉴定的程序还在利用显色平板分离进行念珠菌鉴定。[2]但是这种鉴定方法在应用时还要考虑培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响，当指示剂、培养时间、培养温度的不一样时会影响鉴定结果的显示。本次主要抽选16株念珠菌進行标准的分离、培养、鉴定，再对照其中8株念珠菌DNA分子作为对照，从而了解利用这种方法进行鉴定的操作性。[3]
1 资料与方法
1.1 临床资料 材料主要有16株念珠菌分别来自患者的痰、尿、粪、阴道拭子等标本，其中有3株念珠菌，这3株为标准菌株，培养基、显色培养基干粉、科玛嘉显色平板（DIFCO干粉）、沙保弱培养基干粉，DADE鉴定仪，4h快速酵母菌鉴定板，ATB鉴定仪，酵母菌鉴定板。[4]
1.2 方法与观察指标 首先，根据产品的标签要求对念珠菌的培养基准备配置；其次，将念珠菌在最适温度与稳定时间里，将培养基中培养2天时间，再观察念珠菌的生长情况；再次，利用ATB系统进行鉴定，从而将念珠菌在培养基里进行1到2天进行观察生长情况，利用ATB仪器上进行判读鉴定结果显示。[5]
2 结果
2.1 分离培养，对16株临床念珠菌进行分离培养，将16株临床念珠菌在培养基上进行培养，观察它们的生长情况，结果显示：35e的念珠菌优于28e的念珠菌，培养48h的念珠菌优于培养24h念珠菌；不同型号与质量的培养基显色情况也不一样。
2.2 菌株鉴定
首先，采取ATB系统对16株临床念珠菌进行鉴定，可以知道，随着培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响到念珠菌的显色效果，从而影响到菌种的鉴定结果，所以在念珠菌的菌种鉴定中，最好使用相同培养时间、相同培养基、相同的培养温度对16株念珠菌进行鉴定，才能确保对念珠菌的菌种鉴定具有一定的稳定性。
其次，将部分念珠菌用DADE系统4h快速酵母菌鉴定板鉴定，大多数结果与ATB系统48h鉴定结果相同，只有1株不同。
再次，将1株DADE系统和ATB系统鉴定结果不同的念珠菌再次利用DADE系统作鉴定，结果与ATB鉴定结果一致，为邹落念珠菌。
2.3 分子分型 通过Blast程序分析临床分离的16株临床念珠菌的DNA分子类型保守序列特异区测序结果并与Gen Bank中核酸数据比对，得出相同程度最高念珠菌种。
3 讨论
念珠菌是储存在人体的表皮、口腔、肠道等与外界接触的腔道中的一种人体细菌。当人体的抵抗力降低时，念珠菌容易入侵我们人体的腔道，从而发生局部感染现象出现。例如有常见的传染性口角炎、鹅口疮、外耳炎症、脑膜炎、眼部感染、肺部炎症、心内膜炎、腹膜炎、关节炎、尿道感染、外阴阴道炎、擦烂型念珠菌病、甲沟炎、甲癣、骨髓炎、真菌血症、播散性感染等受感染引起的感染症状。
通过念珠菌鉴定研究发现，对16株临床念珠菌进行显色反应，从而利用沙保弱或显色培养基。当孵育温度高时，念珠菌在培养基的生长状况要好的多，当念珠菌在培养基里培养时间长的念珠菌可以生长得更好。其中有1株临床念珠菌利用ATB和DADE系统鉴定显示为邹落念珠菌，DADE系统鉴定为克柔念珠菌，分子分型为近邹落念珠菌，这说明细胞水平鉴定与分子分型存在差异。
实验结果表明，这种方法比细胞水平方法更能解释DNA分子类型的不同，这种方法对念珠菌的菌种的确定具有一定的稳定性。本研究在对念珠菌的鉴定过程中，其中随着培养基的指示剂与培养温度、培养时间不同影响到念珠菌的显色效果，从而影响到菌种的鉴定结果，以及影响菌种的检验结果的准确性。
随着念珠菌感染的常见性、普遍性、复杂性，加强念珠菌微生物学检验结果的快速与准确是如今医学领域的主要解决问题之一，规范检验操作、保证检验结果准确是我们当今医学领域的第一目标。
参考文献
[1] 唐国瑶.口腔念珠菌实验室诊断的进展[J].国外医学口腔医学分册，2009，19（4）：205.
[2] Betty AF，Daniel FS，Alice SW，et al.Bailey& scottcs diagnostic microbiology [M].10th ed.St.Louis：Mosby，2008：940-958.
[3] 李真.侵袭性念珠菌病的实验室诊断研究进展[J].检验医学，2007，22（1）：102-104.
[4] Chen YC，Eisner JD，Kat tar MM，et al.Poly morph I c internal transcribed spacer region 1 DNA sequences identify medically important yeasts [J].JClin Micro bio，2009，39（11）：4042-4051.
[5] Okop Ien B，Bas Iak M，Madej A，et al.Markers of in flam at or y process in stable and unstable coronary artery disease [J].Pol Merkur Lekarsk，2006，21（121）：69-72.