论文部分内容阅读
目的
通过超声靶向破碎微泡技术与阳离子聚合物/目的基因质粒DNA/核定位信号(PEI/DNA/NLS)复合物联合构建新型基因转导体系，并评价用该体系转染293T细胞的转染效率。
方法用琼脂糖凝胶试验检测PEI/DNA/NLS复合物是否构建成功以及PEI/NLS对质粒DNA是否存在保护作用。利用超声基因转染仪作用于质粒DNA、PEI/DNA复合物，PEI/DNA/NLS复合物，声诺维微泡(SonoVue)/DNA，SonoVue/PEI/DNA复合物以及SonoVue/PEI/DNA/NLS复合物的六组293T细胞30 s后，于细胞培养箱内培养24 h后，分别通过倒置荧光显微镜和流式细胞仪来观察绿色荧光蛋白的表达情况及转染效率。同时使用CCK-8试剂检测超声靶向破碎微泡(ultrasound targeted microbubble destruction，UTMD)联合PEI/DNA/NLS复合物的基因转导体系转染293T细胞后的细胞活性。
结果①利用静电吸附作用成功构建了PEI/DNA/NLS复合物，琼脂糖凝胶电泳实验证明PEI以及NLS具有保护DNA不被核酸内切酶降解的作用，但此保护作用有时间限制。②UTMD＋PEI/DNA/NLS复合物组在体外介导EGFP基因的转染效率优于UTMD＋PEI/DNA复合物组以及PEI/DNA/NLS复合物(P<0.05)。③超声波的机械损伤以及PEI的化学毒性会造成细胞的损伤，但是各组之间细胞的活性差异无统计学意义。
结论UTMD联合PEI/DNA/NLS复合物构建新型基因转导体系可以提高基因的转染效率，从而提高基因治疗的效率。该基因转导体系有望为成临床基因治疗提供新的高效转染技术。