【摘 要】
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目的 完成红花Carthamus tinctorius PAL基因家族的生物信息学分析,克隆1条红花PAL4基因编码区序列,通过农杆菌介导的方法,实现CtPAL4在红花悬浮细胞中的过表达.方法 在红花
【机 构】
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吉林农业大学生命科学学院,生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,吉林长春130118
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目的 完成红花Carthamus tinctorius PAL基因家族的生物信息学分析,克隆1条红花PAL4基因编码区序列,通过农杆菌介导的方法,实现CtPAL4在红花悬浮细胞中的过表达.方法 在红花基因组测序基础上,对红花PAL家族进行全基因组分析,利用荧光定量PCR (RT-PCR)方法克隆1条红花PAL4编码区序列,并进行生物信息学分析,利用clustalWl.83软件构建系统进化树,在CtPAL4基因序列2端引入酶切位点BglⅡ和BstE Ⅱ,构建含有35 S启动子的植物超表达载体pCAMBIA3301-CtPAL4,并在红花悬浮细胞中进行超表达.结果 红花基因组中注释到6个PAL基因,分析显示5个基因具有典型的苯丙氨酸解氨酶的功能结构域及活性位点,并进行启动子和进化分析.CtPAL4基因编码707个氨基酸,相对分子质量为76820,具有典型的苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的功能结构域及活性位点,编码蛋白的三维结构与PAL的X射线蛋白质晶体结构类似.系统进化分析表明,CtPAL4基因编码的蛋白与拟南芥的亲缘关系最近.GUS染色结果证实,成功建立红花悬浮细胞遗传转化体系,并初步实现了CtPAL4基因在红花悬浮细胞中的过表达.结论 成功克隆l条红花PAL4编码区基因CtPAL4,并构建了植物表达载体pCAMBIA3301-CtPAL4,初步在红花悬浮细胞中实现了超表达,为研究CtPAL4基因在红花黄酮代谢途径的功能奠定基础.
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