【摘 要】
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SYBRGreenI是一种在实时定量PCR检测中广泛使用的DNA结合染料。PCR结果可以通过溶解曲线分析来鉴定而不再需要使用传统的琼脂糖凝胶电泳来鉴定,因为PCR特定扩增产物的溶解温
【机 构】
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中国农业大学食品科学与营养工程学院; 中国农业大学食品科学与营养工程学院 北京100083; 北京100083;
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863 项目)(2001AA212291)
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SYBRGreenI是一种在实时定量PCR检测中广泛使用的DNA结合染料。PCR结果可以通过溶解曲线分析来鉴定而不再需要使用传统的琼脂糖凝胶电泳来鉴定,因为PCR特定扩增产物的溶解温度的特异性是类似于琼脂糖凝胶电泳中的扩增条带的特异性。建立了基于扩增产物溶解曲线分析的二重实时定量PCR对转bar和pat基因的作物进行检测的方法。获得了bar和pat基因的特异性扩增产物和他们的特定溶解温度,并且通过几组不同的二重PCR对他们的扩增产物进行了溶解曲线鉴定。还对影响溶解曲线分析的一些因素进行了研究和讨论。结果表明基于扩增产物的溶解温度建立的二重PCR检测方法是可行的,该方法对转bar和pat基因的作物可达到0.9%的检测限。
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