【摘 要】
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[目的]解析草菇多酚氧化酶基因家族序列信息,明确其特征和表达模式.[方法]通过转录组测序找出含有酪氨酸酶结构域的基因,并根据搜索得到的序列设计引物,以不同发育时期的草菇v26菌株,以及草菇蛋形期外菌膜、菌盖、菌柄等不同组织为材料提取RNA,经反转录为cDNA,扩增获得草菇多酚氧化酶基因序列.采用在线生物信息学网站预测草菇多酚氧化酶的理化性质.采用RT-PCR的方法,检测草菇不同发育时期和不同组织部位多酚氧化酶的表达模式.[结果]获得4个草菇多酚氧化酶基因家族的CDS序列,依次命名为VvPPO1、VvPPO
【机 构】
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广东省农业科学院蔬菜研究所/广东省草菇科技创新中心/广东省蔬菜新技术研究重点实验室,广东 广州 510640;广东省现代农业装备研究所,广东 广州 510630;广东省农业技术推广中心,广东 广州 5
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[目的]解析草菇多酚氧化酶基因家族序列信息,明确其特征和表达模式.[方法]通过转录组测序找出含有酪氨酸酶结构域的基因,并根据搜索得到的序列设计引物,以不同发育时期的草菇v26菌株,以及草菇蛋形期外菌膜、菌盖、菌柄等不同组织为材料提取RNA,经反转录为cDNA,扩增获得草菇多酚氧化酶基因序列.采用在线生物信息学网站预测草菇多酚氧化酶的理化性质.采用RT-PCR的方法,检测草菇不同发育时期和不同组织部位多酚氧化酶的表达模式.[结果]获得4个草菇多酚氧化酶基因家族的CDS序列,依次命名为VvPPO1、VvPPO2、VvPPO3、VvPPO4,其中VvPPO1 CDS全长1596 bp、编码531个氨基酸,VvPPO2 CDS全长2685 bp、编码894个氨基酸,VvPPO3 CDS全长1593 bp、编码530个氨基酸,VvPPO4 CDS全长2067 bp、编码688个氨基酸.生物信息学分析表明,4个基因编码的蛋白均含有2个铜离子结合区,为亲水性蛋白;RT-PCR结果显示,4个基因在草菇发育的菌丝期、原基期、蛋形期、成熟期均有表达,VvPPO1、VvPPO3和VvPPO4的表达量在子实体时期高于菌丝期,在蛋形期VvPPO1和VvPPO4在外菌膜的表达量比在菌柄和菌盖中的表达量高.[结论]在草菇中搜索得到4个多酚氧化酶基因,均含有2个铜离子结合区,4个基因在各个发育时期均有表达.
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