【摘 要】
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用两种不同的表达载体构建、表达人肝癌肿瘤抗啄——衰老标记蛋白-30(SMP—30),并在体外对其表达产物进行纯化和鉴定。PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌抗原SMP—30
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用两种不同的表达载体构建、表达人肝癌肿瘤抗啄——衰老标记蛋白-30(SMP—30),并在体外对其表达产物进行纯化和鉴定。PCR方法扩增经SEREX技术筛选出的人肝细胞癌抗原SMP—30羧基末端165个AA的DNA序列,分别与pMAL—C2和pET16b两种表达载体重组后转入相应的宿主菌中诱导表达,并对表达产物进行分离纯化和鉴定。结果克隆的SMP—30基因经DNA测序与已公布的序列相同。pMAL—C2和pET16b两种重组载体分别表达出带麦芽糖结合蛋白和带10个组氨酸的SMP—30融合蛋白,麦芽糖结合蛋白——SMP—30是以可溶性蛋白形式表达,而带组氨酸的SMP—30则以包涵体的形式存在,对表达蛋白质N-末端15个氨基酸进行测序,结果与预期的完全相同。结果说明pMAL—C2表达载体更为适合于SMP—30蛋白质的表达;实验为肿瘤抗原免疫研究打下了基础。
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