【摘 要】
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目的评价星形胶质细胞趋化因子C-C型配体2(CCL2)在小胶质细胞激活中的作用。方法出生后1~2 d的C57BL/6J小鼠,分离脑组织的星形胶质细胞和小胶质细胞。实验Ⅰ 星形胶质细胞以3×104个/孔的密度接种于6孔板中(2 ml/孔),采用随机数字分为5组(n=3):对照组(C组)、TNF-α组、1 μg/ml CCL2小干扰RNA(siRNA)组(CCL2-siRNA1组)、2 μg/ml C
【机 构】
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目的评价星形胶质细胞趋化因子C-C型配体2(CCL2)在小胶质细胞激活中的作用。
方法出生后1~2 d的C57BL/6J小鼠,分离脑组织的星形胶质细胞和小胶质细胞。实验Ⅰ 星形胶质细胞以3×104个/孔的密度接种于6孔板中(2 ml/孔),采用随机数字分为5组(n=3):对照组(C组)、TNF-α组、1 μg/ml CCL2小干扰RNA(siRNA)组(CCL2-siRNA1组)、2 μg/ml CCL2-siRNA(CCL2-siRNA2组)和阴性对照siRNA组(NC-siRNA组)。C组常规培养,其它4组加入10 ng/ml TNF-α孵育15 min,PBS洗脱后培养3 h。加入TNF-α前24 h时,CCL2-siRNA1组和CCL2-siRNA2组加入CCL2-siRNA 1或2 μg/ml,NC-siRNA组加入NC-siRNA 2 μg/ml。采用ELISA法测定CCL2浓度。实验Ⅱ 将小胶质细胞以3×104个/孔的密度接种于6孔板中(2 ml/孔),采用随机数字表法分为3组(n=3):对照组(C组)、TNF-α组和CCL2-siRNA组。C组常规培养,TNF-α组取星形胶质细胞加入10 ng/ml TNF-ɑ孵育15 min,PBS洗脱后培养3 h,取其上清,加入小胶质细胞中孵育24 h;CCL2-siRNA组取星形胶质细胞加入2 μg/ml CCL2-siRNA孵育24 h,再加入10 ng/ml TNF-ɑ孵育15 min,PBS洗脱后培养3 h,取其上清,加入小胶质细胞中孵育24 h。采用免疫荧光法检测小胶质细胞活性,Transwell迁移实验测定小胶质细胞迁移能力。
结果实验Ⅰ 与C组比较,TNF-α组、CCL2-siRNA1组、CCL2-siRNA2组和NC-siRNA组CCL2浓度升高(P<0.05);与TNF-α组和NC-siRNA组比较,CCL2-siRNA1组和CCL2-siRNA2组CCL2浓度降低(P<0.05);TNF-α组和NC-siRNA组CCL2浓度比较差异无统计学意义(P>0.05)。实验Ⅱ 与C组比较,TNF-α组和CCL2-siRNA组小胶质细胞活性升高,迁移能力增强(P<0.05);与TNF-α组比较,CCL2-siRNA组小胶质细胞活性降低,迁移能力减弱(P<0.05)。
结论星形胶质细胞CCL2参与了小胶质细胞的激活。
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