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目的
获得中国人的肺表面活性物质结合蛋白A(SP-A) 6A cDNA基因克隆,并进行序列分析,为进一步研究中国人SP-A基因型特点提供方法和资料,同时也为SP-A基因表达调控。
方法以正常人肺组织mRNA为模板,采用逆转录反应(RT)-PCR、巢式-PCR及基因克隆技术,获得pUC19/SP-A 6A克隆,并测序证实。
结果从正常中国人肺组织中提取到完整mRNA,经RT-PCR、巢式-PCR扩增,得到约840 bp目的片段,分别用BamH I、Hind Ⅲ和Pst I酶切,酶切片段与分析结果一致,分别为138、275、416、388和417 bp。将840 bp目的片段与测序载体连接,测序结果显示,与已发表的SP-A 6A序列相比,有若干个碱基不同,随机重复2个克隆,证实位于第19、62、133位密码子的改变是稳定存在的。
结论证实获得的中国人SP-A基因克隆为6 A3型。