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目的:研究内源性双链RNA活化人肝内胆管上皮细胞(human intrahepatic biliary epithelial cells,Hi BEC)中Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)引起的凋亡及其信号通路变化。方法:体外培养Hi BEC,同时通过反复冻融制备坏死的Hi BEC。TLR3活化组:将死亡细胞与活细胞共同培养6 h;对照组:以核酸酶处理过的坏死细胞与活细胞共培养,每组设3复孔。以Annexin V/PI测定细胞凋亡率,同时以JC-1荧光探针测定细胞线粒体膜电位。荧光定量PCR法检测TLR3和β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(Toll-interleukin 1 receptor domain-containing adaptor inducing interferon-β,TRIF)的表达量,同时以流式细胞术测定Caspase-3的活性。结果:TLR3活化组的Hi BEC经内源性活化后,凋亡率为(33.32±2.39)%,明显高于通过RNA酶处理后的对照组[(2.83±0.53)%,P<0.001);线粒体膜电位检测结果表明,TLR3活化组的Hi BEC经内源性活化后,表达绿色荧光的细胞比例明显增加,均值为(34.75±6.54)%,明显高于RNA酶处理后的对照组[(3.21±1.24)%,P<0.001);定量PCR分析发现TLR3活化组的TLR3和TRIF mRNA相对表达量分别为3.75±0.22和4.05±0.14,均明显高于对照组(分别为0.98±0.05和1.03±0.07,P<0.001);流式细胞术检测结果显示,TLR3活化组细胞Caspase-3的平均表达量为(27.1±3.5)%,明显高于RNA酶处理组[(8.5±2.1)%,P<0.001)。结论:内源性双链RNA可以通过活化TLR3诱导Hi BEC凋亡,可能在原发性胆汁性肝硬化的炎性损伤过程中发挥重要作用。