【摘 要】
：
目的 建立地鼠多瘤病毒(hamster polyomavirus,HaPyV)PCR检测方法,并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测.方法 设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物,以含HaPyV VP1片段的质粒PMD19T-HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物.以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异
【机 构】
：
610023成都生物制品研究所有限责任公司生物技术室,610023成都生物制品研究所有限责任公司生物技术室,610023成都生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究室,610023成都生物制品研究所有
论文部分内容阅读
目的 建立地鼠多瘤病毒(hamster polyomavirus,HaPyV)PCR检测方法,并应用于乙型脑炎减毒活疫苗生产过程中地鼠肾细胞的感染检测.方法 设计针对HaPyV衣壳蛋白VP1基因片段的特异引物,以含HaPyV VP1片段的质粒PMD19T-HaPyV688为模板进行PCR扩增并测序确认扩增产物.以多种病毒DNA为模板进行PCR扩增,并对扩增产物进行斑点杂交鉴定以验证PCR方法的特异性.将定量的质粒PMD19T-HaPyV688 10倍系列稀释后进行PCR敏感性检测.以小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MuPyV)检验PCR法对质粒DNA和病毒DNA检测的一致性.应用建立的方法对生产用地鼠肾细胞悬液进行HaPyV DNA检测.结果 仅含有质粒PMD19T-HaPyV688和MuPyV DNA的样品能够扩增出600 bp的片段,经斑点杂交及测序证明其分别为HaPyV和MuPyV的VP1特异基因片段.PCR所能检出的PMD19T-HaPyV688和MuPyV的最少DNA拷贝数分别为5300和590.7个亚批生产用地鼠肾细胞悬液的HaPyV检测结果均为阴性.结论 建立的PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于生产用地鼠肾细胞HaPyV感染的检测。
其他文献
多种多糖-蛋白结合疫苗被开发成功,用于预防b型流感嗜血杆菌、脑膜炎球菌和肺炎链球菌感染,为婴幼儿健康提供了保障.常用的载体蛋白是破伤风类毒素、白喉类毒素和白喉类毒素突变体CRM197.在临床研究中观察到,相同载体或不同载体结合疫苗同时接种,或者与DTP/HBV/IPV等疫苗同时接种时,会干扰对某些抗原的免疫应答,其中可能有多种机制在起作用.随着更多的结合疫苗有望进入婴幼儿期基础免疫程序和无细胞百日
美国加利福尼亚医学研究所和斯坦福大学的最新研究表明，灭活的面包酵母可预防曲霉病。研究者用灭活的面包酵母间隔1周接种小鼠3次，结果显示，免疫小鼠在感染曲霉菌后仍存活，甚至是感染极大剂量曲霉菌的小鼠。
背景：在中、低收入国家的5岁以下儿童中，轮状病毒引起的腹泻相关死亡多于任何其他病原因子。在高收入国家中，轮状病毒也是腹泻相关住院的常见原因。WHO建议所有儿童接种单价轮状病毒疫苗（RVl，Rotarix，GlaxoSmithKline生物制品公司）或5价轮状病毒疫苗（RV5，RotaTeq，Merck公司），尤其是在腹泻致死占全部死亡10％以上的国家中。兰州羔羊轮状病毒疫苗（LLR，兰州生物制品研
目的 建立检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)活性的中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞簇集法,并将建立的方法应用于无细胞百日咳疫苗生产的质量控制.方法 将PT标准品系列稀释后与培养的CHO细胞混合,观察PT引起CHO细胞簇集的敏感度,并研究反应时间、反应溶液的pH值、缓冲液浓度、加样顺序等因素对PT引起CHO细胞簇集的影响.应用建立的方法检测百
最近，比利时安特卫普大学的研究人员在6例HIV阳性患者中进行了新型治疗性HIV疫苗的临床试验。他们采用电穿孔技术将编码HIVGag蛋白和Tat—Rev—Nef嵌合蛋白的mRNA导入受试者的树突状细胞制备树突状细胞疫苗。结果显示，处理的树突状细胞可表达HIV蛋白，并可激活CD8^＋细胞。疫苗接种者的抗HIV免疫应答（尤其是HIV1特异性IFN-γ应答）强于未接种者。
目的 建立用于鼠疫疫苗纯菌检查的噬菌体裂解法,并与现行的直接接种纯菌检查方法进行比较.方法 使用鼠疫噬菌体裂解在细菌分类学上与鼠疫杆菌相近的细菌及常见的污染细菌,确定鼠疫噬菌体对鼠疫杆菌裂解的特异性.分别将小肠结肠炎耶尔森菌和大肠杆菌定量掺入鼠疫疫苗来制备模拟污染鼠疫疫苗,采用噬菌体裂解纯菌检查方法检测模拟污染鼠疫疫苗,并将检测结果与现行的直接接种纯菌检查方法的检测结果进行比较.结果 鼠疫噬菌体能
此文介绍了目前国际上使用的奥地利、德国和俄罗斯制造的蜱传脑炎疫苗的免疫原性和效果、保护作用持续时间、加强免疫、安全性、交叉保护作用和成本效益等，以及WHO对使用该疫苗的政策。
目的 调查分析目前国内常见养殖淡水鱼类肠道菌群对不同抗生素的耐药性现状。方法选取两种常见养殖淡水鱼类的粪便标本，分别在添加了7种抗生素[青霉素G、头孢呋辛钠、庆大霉素、环丙沙星、四环素、红霉素和复方新诺明（SMZ）]的琼脂平板上进行培养，通过PCR法分析所获得的耐药菌株的16SrRNA基因序列并对其种属进行鉴定。采用，检验作两种鱼之间的比较。结果筛选后共得到2956株耐药菌，对青霉素G、头孢呋辛钠
目的 研究建立符合新版药品生产质量管理规范(2010年修订)要求的水痘减毒活疫苗生产厂房的用户需求标准(user requirement specification,URS).方法 将生产厂房的URS分为工艺、设施、设备、环境健康安全四大部分,并分别按简介、法规标准、正文、修订历史等内容格式进行描述.结果 简介部分包括项目介绍、文件的范围和目的、术语等.法规标准包括行业法规、设计标准、建设标准、企
2013年1月,在全球消灭脊髓灰质炎行动展现胜利曙光之时,全球消灭脊髓灰质炎行动(GPEI)发布了新制订的《2013-2018年消灭脊髓灰质炎最后阶段战略计划》.此文介绍了战略计划的要点。