糖尿病视网膜病变患者血清中微小RNA-195表达结果检测

来源 :中华眼底病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:iqwanifir
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目的 观察糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中微小RNA(miRNA)-195(miR-195)的表达.方法 抽取DR患者、糖尿病(DM)患者及正常受检者静脉血5 ml,提取血浆总RNA,纯化.通过基因芯片筛选出在DR患者血清中具有差异表达的miRNA,并采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)验证基因芯片检测结果.采用生物信息学预测miRNA调控的潜在靶基因,筛选出miR-195及其靶基因高迁移率族蛋白B1(HMGB1).将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)转染miR-195抑制物和(或)miR-195模拟物,建立miR-195高表达和低表达细胞模型,分为空白对照组、高表达(或)低表达组、阴性对照组.采用实时定量RT-PCR检测转染后细胞中HMGB1 mRNA的相对表达比率.采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测转染后细胞中HMGB1蛋白的表达.结果 基因芯片检测结果显示,DR组miR-195表达较DM组下调8.34倍,较正常组下调11.47倍.RT-PCR验证结果与基因芯片检测结果相符.与DM组(F=0.034,t=8.057)和正常组(F=0.370,t=9.522)比较,DR组miR-195表达均明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05).RT-PCR检测结果显示,高表达组HUVEC的HMGB1 mRNA表达较空白对照组(F=0.023,t=11.287)和阴性对照组(F=0.365,t=7.471)明显下调,差异有统计学意义(P<0.05);低表达组HUVEC的HMGB1 mRNA表达较空白对照组(F=0.053,t=10.871)和阴性对照组(F=0.492,t=6.883)明显上调,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测结果显示,高表达组HUVEC的HMGB1蛋白表达较空白对照组(F=0.021,t=8.820)、阴性对照组(F=0.039,t=7.401)明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);低表达组HUVEC的HMGB1蛋白表达较空白对照组(F=0.186,t=10.092)、阴性对照组(F=0.017,t=12.923)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DR患者血清中miR-195表达明显下调.
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