【摘 要】
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建立重组基因酵母筛选雄性内分泌干扰物的关键是雄激素受体(AR)在酵母细胞中的表达。为此,本文用PCR方法从W303-1A酵母基因组扩增3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子,将其插入到p
【机 构】
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扬州大学医学院预防医学教研室; 扬州大学动物科学与技术学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81041111);2011年江苏省大学生实践创新训练计划项目资助;扬州大学2011年度大学生学术科技创新基金资助项目(B11129)
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建立重组基因酵母筛选雄性内分泌干扰物的关键是雄激素受体(AR)在酵母细胞中的表达。为此,本文用PCR方法从W303-1A酵母基因组扩增3-磷酸甘油醛脱氢酶(GPD)启动子,将其插入到pYestrp2载体的SwaⅠ和BamHⅠ酶切位点,将所构建成的载体命名为pGPD。将5′和3′端含有BamHⅠ和EcoRⅠ黏性末端V5抗原表位DNA,插入到pGPD相应的酶切位点,构建成pGPDV5载体。用PCR方法从pcDNA3.1/AR扩增2 723bp全长的AR开放性阅读框(ORF),将其插入到pGPDV5载体,构建成与V5抗原表位相融合的酵母表达载体pGPDV5/AR,将其转入W303-1A酵母细胞。用Western blot检测该酵母细胞提取液中的AR与V5相融合的表达蛋白,一抗选用小鼠源性V5单克隆抗体(IgG2a),二抗选用偶联有辣根过氧化物酶(HRP)的羊抗小鼠的多克隆抗体(IgG)。结果表明,与V5相融合的AR蛋白在酵母细胞中成功表达。
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