【摘 要】
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目的 观察野生型p53基因在结肠癌细胞系中能量代谢转换中的作用.方法 利用流式细胞学方法检测p53在结肠癌细胞系HCT116中对荧光标记的葡萄糖类似物:2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,3-
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤研究所/胃肠外科, 武汉,430030
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目的 观察野生型p53基因在结肠癌细胞系中能量代谢转换中的作用.方法 利用流式细胞学方法检测p53在结肠癌细胞系HCT116中对荧光标记的葡萄糖类似物:2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,3-4羟氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)摄取的影响,进一步采用Western blot、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测其可能的下游调控关键酶三磷酸腺苷(ATP)柠檬酸裂解酶(ACLY)、糖酵解的关键酶葡糖糖6-磷酸脱氢酶(G6PD)、乳酸脱氢酶(LDHA)、醛缩酶(ALDOA)及M2型丙酮酸激酶(PKM2)的蛋白及转录水平的表达变化.结果 比较于p53缺失型(KO) HCT116细胞,p53野生型(WT)的HCT116细胞对葡萄糖的摄取能力下降41％ (P＜0.05).进一步利用Western blot法检测能量代谢关键基因进行蛋白水平的比较及半定量分析后发现,相对于p53 KO的HCT116细胞,调控细胞脂质代谢关键酶ACLY下调0.3984(t=7.154,P＜0.025)、糖酵解的关键酶G6PD下调0.3578(t=10.99,P＜0.01)、LDHA下调0.2227(t=7.182,P＜0.05),证明上述基因在p53 WT细胞中表达受抑制,而另外两个糖酵解关键酶ALDOA及PKM2的表达则无明显变化(P＞0.05).进一步检测mRNA水平后发现p53 WT的HCT116细胞中ACLY基因下调6.61倍(t=43.18,P＜0.01)、G6PD基因下调6.75倍(t=85.90,P＜0.01)及LDHA基因下调0.99倍(t=32.42,P＜0.01),而ALDOA及PKM2则无明显变化(P＞0.05).结论 野生型p53作为抑癌基因参与肿瘤能量代谢的调控过程,其可能通过抑制多种关键酶发挥作用.
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