【摘 要】
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目的:构建耐阿糖胞苷(Ara-C)的急性淋巴细胞白血病(ALL)耐药细胞株,并探讨可能耐药机制.方法:低浓度Ara-C持续诱导培养Jurkat和Nalm-6细胞,构建Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株.CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR检测多药耐药基因和Ara-C代谢酶mRNA表达水平,免疫印迹法检测细胞周期蛋白表达水平.结果:成功构建了Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株,耐药指数分别为1973.908±161.
【机 构】
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西南医科大学附属医院儿科,四川省出生缺陷临床医学研究中心,四川泸州646000
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目的:构建耐阿糖胞苷(Ara-C)的急性淋巴细胞白血病(ALL)耐药细胞株,并探讨可能耐药机制.方法:低浓度Ara-C持续诱导培养Jurkat和Nalm-6细胞,构建Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株.CCK-8法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR检测多药耐药基因和Ara-C代谢酶mRNA表达水平,免疫印迹法检测细胞周期蛋白表达水平.结果:成功构建了Jurkat/Ara-C和Nalm-6/Ara-C耐药细胞株,耐药指数分别为1973.908±161.163和7231.643±1190.624,耐药细胞株对阿霉素等常用化疗药物无交叉耐药.流式细胞术检测结果显示,Jurkat/Ara-C细胞G0/G1期比例增加(P＜0.05),G2/M期减少(P＜0.05),而Nalm-6/Ara-C细胞周期分布较Nalm-6细胞无明显改变.实时荧光定量PCR检测发现脱氧胞苷激酶和胞苷脱氨酶在耐药细胞中低表达(P＜0.05),MRP在Nalm-6/Ara-C细胞中高表达(P＜0.05),MDR1、LRP和BCRP未见明显增加.蛋白免疫印迹检测发现CyclinB1在耐药细胞中明显低表达(P＜0.05),CyclinD1未见明显改变.结论:低浓度持续诱导法成功构建了ALL耐Ara-C细胞株,其耐药机制可能与脱氧胞苷激酶和CyclinB1的缺乏有关.
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