【摘 要】
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核糖-5-磷酸异构酶(RpiB)是新型功能性稀有糖D-阿洛糖生物合成过程中的重要酶。克隆ThermotogalettingaeTMO来源的RpiB基因,以pET-22b(+)为载体,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重
【机 构】
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江南大学食品科学与技术国家重点实验室,兰州理工大学生命科学与工程学院,太极集团浙江东方制药有限公司
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(21276001,31171705);绍兴市科技计划项目(2013A23002)
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核糖-5-磷酸异构酶(RpiB)是新型功能性稀有糖D-阿洛糖生物合成过程中的重要酶。克隆ThermotogalettingaeTMO来源的RpiB基因,以pET-22b(+)为载体,E.coliBL21(DE3)为宿主细胞,构建了基因重组菌。诱导剂IPTG可诱导目的蛋白表达;经金属亲和层析纯化得到电泳纯的重组蛋白,SDS—PAGE显示17ku处出现显著的特征蛋白质条带。活性检测结果表明,该重组RpiB具有较高的产D-阿洛糖生物活性,静息细胞和纯酶反应3h后转化率分别为19%和23%。
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