【摘 要】
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为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体.利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒.将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性.利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点.结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体.体外转染结果表明,该区域
【机 构】
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扬州大学 动物科学技术学院,江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室,江苏 扬州 225009
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为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体.利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒.将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性.利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点.结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体.体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点.研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础.
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