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【摘要】目的:探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)两种血清梅毒抗体检测方法的优劣。方法:选取我市2006年10月~2008年10月献血者和梅毒临床患者共2000份血清标本,其中包括1700份健康献血者血清、300份梅毒患者血清。分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)两种血清梅毒抗体检测方法检测。结果:在300份梅毒患者血清中,TPPA共检出梅毒螺旋体抗体阳性295份,TP-ELISA共检出阳性298份,两法的阳性检出率分别为98.3%和99.3%。TP-ELISA从1700份健康献血者中检出6份阳性,TPPA未检出阳性,后经确认6例为假阳性,TP-ELISA的假阳性率为0.35%。结论:ELISA和TPPA都具有较高的敏感性和特异性。ELISA方法成本低,操作简便,极大地减少了人为因素的影响,结果判断客观、准确,最适合血站大规模的血液筛检。
【关键词】酶联免疫吸附试验;ELISA;梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验;TPPA;梅毒抗体
【中图分类号】R377+1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)10-0077-01
梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病.目前梅毒检测常用方法[1]7sup>主要有:快速血浆反应素试验(RPR)、甲苯胺红快速反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体EUSA试验(ElSA)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)等,有时也用到免疫印迹法和PCR方法。高敏感性和特异性的检验方法对于该病的确诊和治疗具有重要意义。我们采用梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对2000份血清标本进行了检测比较,现报道如下。
1材料与方法
1.1标本来源选取我市2006年10月~2008年10月献血者和梅毒临床患者共2000份血清标本,男1236例、女764例,其中包括1700份健康献血者血清、300份梅毒患者血清。
1.2试剂TP-ELISA试剂盒购自北京万泰生物药业有限公司,IPPA试剂盒购自日本富士瑞必欧株式会社,均批检合格,在有效期内使用。
1.3方法所有标本均采用ELISA和TPPA进行血清梅毒螺旋体抗体平行检测,具体操作和结果判定均按试剂盒说明书进行。
1.4统计学处理采用统计学软件SPSS13.0对所得数据进行统计学分析,率的检验采用卡方检验,P<0.05,差异有统计学意义。
2结果
2.1酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)两种方法检测对300份梅毒患者血清检测结果比较,见表1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200910/mzmj20091057-1-l.jpg)
2.2两种方法对1700份献血者血清检测结果见表2。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200910/mzmj20091057-2-l.jpg)
3讨论
梅毒是一种由苍白密螺旋俸所致的密螺旋体病,主要通过性接触、血液、母要垂直传播。20世纪60年代初得到较彻底的控制。1973年梅毒死灰复燃,卷土重来,20世纪80年代后期,国内各地先后均有早期梅毒的病例报道,以后呈直线上升,成为仅次于艾滋病的对人体危害最大的性传播疾病.无偿献血者血液初筛检测中,梅毒抗体阳性率也高达2.0%.其中工人、农民、流动人口的检测阳性率为3.58%[2]。而且,早期梅毒患者作为供血者,可以通过输血传染梅毒[3]。因此,必须选用高质量的梅毒检测试剂,加强对献血者梅毒的检测,以控制其经输血传播。
人体感染梅毒螺旋体后,可以产生特异性梅毒螺旋体抗体和非特异性抗体即反应素,前者比后者出现得早,即使通过抗梅毒治疗后,梅毒螺旋体抗体仍可终生存在[4]。TPPA试验方法是将特异性TP抗原包被在明胶颗粒上,省略了吸收剂,不受生物因素影响,与血清中特异性TP 抗体结合后出现肉眼可见的凝集反应的检测方法。TP以是目前公认较好的梅毒抗体确认方法,敏感性高,特异性强。ELISA法是利用基因重组工程合成抗原,检测血清中梅毒特异性抗体,在梅毒各期均有较高敏感性,TP-ELISA是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔,并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性IgM和IsG抗体,对早期和晚期梅毒都有较高的检出率[5],但ELISA法也存在着假阳性问题[6]。
本文结果表明,TP-ELISA法的假阳性率为0.35%。通过本文实验,我们发现ELISA和TPPA都具有较高的敏感性和特异性,两法的检测结果无显著性差异(P>0.05)。因TPPA用肉眼判断结果,使结果可靠性下降,并且试剂昂贵,整个检验过程几乎全部依赖于手工,操作繁琐,存在操作出错的风险,检测时需将样本作系列稀释,不利于大批量样本筛查,也不便用于疗效判断。而ELISA现已利用全自动加样器和全自动酶免分析仪,实现了从标本加样、温育、洗板、加试剂到结果判断等整个检验过程的完全自动化,可同时检测大批量标本,操作简便,极大地减少了人为因素的影响;可实现室内质量控制的标准化;结果判断客观、准确;利用微机保存并管理原始检验结果,便于查询;适合血站大规模的血液筛检[7]。因此,综合考虑方法学和实际操作等因素,ELlSA目前最适合血站大规模的血液筛检。
参考文献
[1]王培华.输血技术学[M],第2版.北京:人民卫生出版社,2002:113-116.
[2]利忠,黄宏科,何伟胜.崇左市无偿献血者梅毒感染情况的初步调查[J].广西医学,2005,27:141
[3]周林,武峰.输血医疗纠纷与事故的防范[M].北京:中国科技出版社。2006:204
[4]王培华.输血技术学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2002:113-116
[5]胡小兵,李俊杰,赵艳杰.TRUST与TP—ELISA法对无偿献血者血清梅毒检测对比分析[J].中国误诊学杂志,2005,5(5):885~886
[6]林常青.RPR和TP-PA法梅毒检测方法的比较[J].中国误诊学杂志,2004,4(9):1448
[7]刘明,张小华.ELISA法与TRUST法检测梅毒结果的分析[J].中国输血杂志,2002,15(2):122-123
(收稿日期:2009.02.14)
【关键词】酶联免疫吸附试验;ELISA;梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验;TPPA;梅毒抗体
【中图分类号】R377+1【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)10-0077-01
梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病.目前梅毒检测常用方法[1]7sup>主要有:快速血浆反应素试验(RPR)、甲苯胺红快速反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体EUSA试验(ElSA)、梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)和梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)等,有时也用到免疫印迹法和PCR方法。高敏感性和特异性的检验方法对于该病的确诊和治疗具有重要意义。我们采用梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对2000份血清标本进行了检测比较,现报道如下。
1材料与方法
1.1标本来源选取我市2006年10月~2008年10月献血者和梅毒临床患者共2000份血清标本,男1236例、女764例,其中包括1700份健康献血者血清、300份梅毒患者血清。
1.2试剂TP-ELISA试剂盒购自北京万泰生物药业有限公司,IPPA试剂盒购自日本富士瑞必欧株式会社,均批检合格,在有效期内使用。
1.3方法所有标本均采用ELISA和TPPA进行血清梅毒螺旋体抗体平行检测,具体操作和结果判定均按试剂盒说明书进行。
1.4统计学处理采用统计学软件SPSS13.0对所得数据进行统计学分析,率的检验采用卡方检验,P<0.05,差异有统计学意义。
2结果
2.1酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)两种方法检测对300份梅毒患者血清检测结果比较,见表1。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200910/mzmj20091057-1-l.jpg)
2.2两种方法对1700份献血者血清检测结果见表2。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200910/mzmj20091057-2-l.jpg)
3讨论
梅毒是一种由苍白密螺旋俸所致的密螺旋体病,主要通过性接触、血液、母要垂直传播。20世纪60年代初得到较彻底的控制。1973年梅毒死灰复燃,卷土重来,20世纪80年代后期,国内各地先后均有早期梅毒的病例报道,以后呈直线上升,成为仅次于艾滋病的对人体危害最大的性传播疾病.无偿献血者血液初筛检测中,梅毒抗体阳性率也高达2.0%.其中工人、农民、流动人口的检测阳性率为3.58%[2]。而且,早期梅毒患者作为供血者,可以通过输血传染梅毒[3]。因此,必须选用高质量的梅毒检测试剂,加强对献血者梅毒的检测,以控制其经输血传播。
人体感染梅毒螺旋体后,可以产生特异性梅毒螺旋体抗体和非特异性抗体即反应素,前者比后者出现得早,即使通过抗梅毒治疗后,梅毒螺旋体抗体仍可终生存在[4]。TPPA试验方法是将特异性TP抗原包被在明胶颗粒上,省略了吸收剂,不受生物因素影响,与血清中特异性TP 抗体结合后出现肉眼可见的凝集反应的检测方法。TP以是目前公认较好的梅毒抗体确认方法,敏感性高,特异性强。ELISA法是利用基因重组工程合成抗原,检测血清中梅毒特异性抗体,在梅毒各期均有较高敏感性,TP-ELISA是利用重组梅毒螺旋体的特异性抗原包被酶标板孔,并采用双抗原夹心法检测血清标本中的梅毒特异性IgM和IsG抗体,对早期和晚期梅毒都有较高的检出率[5],但ELISA法也存在着假阳性问题[6]。
本文结果表明,TP-ELISA法的假阳性率为0.35%。通过本文实验,我们发现ELISA和TPPA都具有较高的敏感性和特异性,两法的检测结果无显著性差异(P>0.05)。因TPPA用肉眼判断结果,使结果可靠性下降,并且试剂昂贵,整个检验过程几乎全部依赖于手工,操作繁琐,存在操作出错的风险,检测时需将样本作系列稀释,不利于大批量样本筛查,也不便用于疗效判断。而ELISA现已利用全自动加样器和全自动酶免分析仪,实现了从标本加样、温育、洗板、加试剂到结果判断等整个检验过程的完全自动化,可同时检测大批量标本,操作简便,极大地减少了人为因素的影响;可实现室内质量控制的标准化;结果判断客观、准确;利用微机保存并管理原始检验结果,便于查询;适合血站大规模的血液筛检[7]。因此,综合考虑方法学和实际操作等因素,ELlSA目前最适合血站大规模的血液筛检。
参考文献
[1]王培华.输血技术学[M],第2版.北京:人民卫生出版社,2002:113-116.
[2]利忠,黄宏科,何伟胜.崇左市无偿献血者梅毒感染情况的初步调查[J].广西医学,2005,27:141
[3]周林,武峰.输血医疗纠纷与事故的防范[M].北京:中国科技出版社。2006:204
[4]王培华.输血技术学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2002:113-116
[5]胡小兵,李俊杰,赵艳杰.TRUST与TP—ELISA法对无偿献血者血清梅毒检测对比分析[J].中国误诊学杂志,2005,5(5):885~886
[6]林常青.RPR和TP-PA法梅毒检测方法的比较[J].中国误诊学杂志,2004,4(9):1448
[7]刘明,张小华.ELISA法与TRUST法检测梅毒结果的分析[J].中国输血杂志,2002,15(2):122-123
(收稿日期:2009.02.14)