【摘 要】
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利用RT-PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株2F3中,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因.经DNA测序后,用Linker(Gly4Ser1)3构建成单链抗体(scFv)表达载体
【机 构】
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吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室,中国科学院遗传研究所,中国人民解放军军需大学,超分子结构与谱学教育部重点实验室
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)，科技部资助项目，国家自然科学基金
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利用RT-PCR从分泌有谷胱甘肽结合部位的单克隆抗体杂交瘤细胞株2F3中,扩增出单抗重链可变区和轻链可变区基因.经DNA测序后,用Linker(Gly4Ser1)3构建成单链抗体(scFv)表达载体pTMF-scFv,将重组质粒pTMF-scFv转化到大肠杆菌BL21(DE3),实现了单链抗体的高效表达.表达的单链抗体占菌体总蛋白25%～30%.该重组蛋白以包涵体形式存在,分子量为30 kD.经过金属螯合亲和层析纯化、复性和凝胶过滤纯化,得到电泳均一的单链抗体.再经化学诱变,得到含硒单链抗体酶,其谷胱甘肽
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