【摘 要】
：
目的利用CRISPR/Cas9技术稳定敲除人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞系HSC-3中的TGFBI基因。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对于TG
【机 构】
：
同济大学口腔医学院,同济大学附属口腔医院黏膜病学教研室上海牙修复与再生工程实验中心
【基金项目】
：
国家自然科学基金(81000438);上海市自然科学基金(14ZR1443600)
论文部分内容阅读
目的利用CRISPR/Cas9技术稳定敲除人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞系HSC-3中的TGFBI基因。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计能特异性针对于TGFBI外显子3上下游的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA),并以PX330质粒为骨架构建能表达此sgRNA的真核重组质粒。将此质粒以及PGK-puro质粒共转染HSC-3细胞,用嘌呤霉素抗性筛选细胞克隆,并用PCR、核酸电泳和测序初步确定基因敲除情况,再通过实时荧光定量PCR及免疫印迹法确认细胞中TGFBI的mRNA和蛋白水平的表达变化情况。结果通过CRISPR/Cas9技术,HSC-3中的TGFBI基因外显子3的核苷酸序列已被完全敲除。免疫印迹法检测显示,相对于HSC-3,TGFBI敲除细胞中无法检测到TGFBI蛋白的表达。同时,通过RT-q PCR对部分基因进行检测,发现一系列与细胞周期和上皮间充质转化相关基因表达发生了改变(P<0.05)。结论通过CRISPR/Cas9技术成功获得了TGFBI基因敲除的HSC-3细胞系,为进一步研究TGFBI在OSCC中的作用及其机制提供了理论基础。
其他文献
在上海交通大学材料科学与工程学院金属基复合材料国家重点实验室韩礼元教授领衔团队等不懈努力下，科研人员运用更加经济安全的方法，制备出比蝉翼还薄数十倍的大面积钙钛矿薄膜
采用双逆变技术研制了一台方波交直流钨极氩弧焊多功能焊机。介绍了其基本结构和工作原理，并对逆变主电路及控制方案的设计进行了分析和讨论。
圆盘造球机是生产磁性材料一次预烧料的主要设备，而造球盘又是圆盘造球机的主要部件。为了生产高质量的产品，对造球盘的精度要求较高，焊接变形是该部件生产中的最大问题。通过对
<正> 按照'以销定贷、以效定贷'的原则供应和管理棉花收购资金,无疑是农业发展银行棉花信贷政策上的重大调整和变革。如何将这一新政策顺利实施到位,是摆在农发行面
浙江省湖州市再生资源商会成立大会暨第一次会员代表大会于2008年1月18日在湖州市召开。来自全市3县2区共57名代表参加了会议。市工商联、民政局、贸粮局、供销社等有关部门
5000只种鸭病变、死亡，直接经济损失已达到40多万元!近日，江苏省镇江市丹徒区宝堰镇南庄村养殖大户黄建松再次手擒3只死鸭，到鸭场外深埋。
液压系统的工作一般是可靠的，但由于某些原因产生的一些故障具有隐蔽性和随机性等特点，使得利用单一的方法对故障的诊断有一定困难．运用综合的诊断方法，提高了故障诊断的效率和准
高等职业教育注重技能型人才培养,这是社会主义市场经济完善和发展的必然要求,也是培养高等职业复合型技术人才的重要任务.计算机学科是实践性非常强的学科,须加强学生操作能
高校图书馆立体阅读推广是一种创新型的服务模式,将读者被动接受服务的方式转换为立体、多维、生动、自主的互动模式,提升了读者的参与热情,在高校图书馆中取得了良好的效果
2012年《中华人民共和国民事诉讼法》修改后,当事人陈述被列为首位证据,2015年出台的《最高人民法院关于适用〈中华人民共和国民事诉讼法〉的解释》第110条明确了当事人陈述