【摘 要】
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将来自大肠杆菌K-12的L-阿拉伯糖异构酶基因araA定向插入表达载体pET-32a（＋）并转入大肠杆菌BL21（DE3）中。经PCR、双酶切鉴定和序列分析,证实重组质粒pET32a-araA构建成功。重组菌
【机 构】
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天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室,上海斯贝生物科技有限公司
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将来自大肠杆菌K-12的L-阿拉伯糖异构酶基因araA定向插入表达载体pET-32a（＋）并转入大肠杆菌BL21（DE3）中。经PCR、双酶切鉴定和序列分析,证实重组质粒pET32a-araA构建成功。重组菌经isopropylthio-β-D-galactoside（IPTG）诱导表达目的蛋白,主要以可溶形式存在。以重悬菌液为酶源,D-半乳糖为底物,在温度60℃、pH7.6时酶活最大,加入1 mmol/L Mn2＋可使活力提高50%以上。
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