【摘 要】
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目的观察芍药内酯苷(AF)对白细胞介素(IL)-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用，并探讨机制是否与调控微小RNA(miR)-149-5p/Wnt1诱导信号通路蛋白1(WISP1)通路有关。方法分离培养远交群(SD)大鼠膝关节软骨细胞，采用10 μg/L的IL-1β建立软骨细胞损伤模型。根据处理方法不同将软骨细胞分为对照(Con)、IL-1β、IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+A
【机 构】
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深圳市人民医院骨科 518000,华南理工大学材料科学与工程学院，广州 510641,深圳市人民医院骨科 518000,深圳市人民医院骨科 518000,深圳市人民医院骨科 518000
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目的观察芍药内酯苷(AF)对白细胞介素(IL)-1β诱导软骨细胞损伤的保护作用，并探讨机制是否与调控微小RNA(miR)-149-5p/Wnt1诱导信号通路蛋白1(WISP1)通路有关。
方法分离培养远交群(SD)大鼠膝关节软骨细胞，采用10 μg/L的IL-1β建立软骨细胞损伤模型。根据处理方法不同将软骨细胞分为对照(Con)、IL-1β、IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H、IL-1β+miR-NC、IL-1β+miR-149-5p、IL-1β+si-NC、IL-1β+si-WISP1、IL-1β+AF+anti-miR-NC、IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中IL-6、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；流式细胞术和蛋白质印记(Western blot)用于分析细胞凋亡和WISP1蛋白表达；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-149-5p和WISP1 mRNA表达。双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-149-5p对WISP1的靶向作用。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析和SNK-q检验。
结果IL-1β组软骨细胞上清液中IL-6(6.11±0.61比2.54±0.25，q＝26.072，P<0.05)、IFN-γ(53.62±5.33比8.14±0.82，q＝44.989，P<0.05)和TNF-α含量(29.54±2.71比4.21±0.42，q＝44.463，P<0.05)高于Con组，细胞凋亡率(28.65±2.71比8.23±0.81，q＝33.622，P<0.05)、WISP1表达(0.92±0.08比0.45±0.04，q＝22.873，P<0.05)高于Con组，miR-149-5p表达(0.44±0.04比1.00±0.05，q＝30.571，P<0.05)低于Con组。IL-1β+AF-L、IL-1β+AF-M、IL-1β+AF-H组软骨细胞上清液中IL-6(5.03±0.49、3.95±0.31、2.86±0.27比6.11±0.61，q＝7.887、14.775、23.735，P<0.05)、IFN-γ(37.19±3.21、24.58±2.44、13.54±1.32比53.62±5.33，q＝16.063、28.391、39.184，P<0.05)和TNF-α(21.65±2.17、12.64±1.28、6.95±0.63，q＝14.014、30.017、40.123，P<0.05)含量低于IL-1β组，细胞凋亡率(22.47±2.23、16.98±1.54、10.54±1.12比28.65±2.71，q＝10.175、19.215、29.818，P<0.05)、WISP1表达(0.78±0.07、0.66±0.06、0.53±0.05比0.92±0.08，q＝6.813、12.653、18.980，P<0.05)低于IL-1β组，miR-149-5p表达高于IL-1β组。IL-1β+miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(3.21±0.31比6.19±0.61，t＝13.065，P<0.05)、IFN-γ(16.47±1.68比54.23±5.33，t＝20.270)和TNF-α含量(9.36±0.94比28.46±2.81，t＝19.338，P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组，细胞凋亡率(12.33±1.25比29.65±2.41，t＝19.139，P<0.05)低于IL-1β+miR-NC组。IL-1β+si-WISP1组软骨细胞上清液中IL-6(3.41±0.34比6.22±0.58，t＝12.539，P<0.05)、IFN-γ(17.23±1.72比55.12±5.41，t＝20.023，P<0.05)和TNF-α(10.33±1.08比27.65±2.74，t＝17.642，P<0.05)含量显著低于IL-1β+si-NC组，细胞凋亡率(13.54±1.47比28.61±2.73，t＝11.678，P<0.05)低于IL-1β+si-NC组。miR-149-5p与WISP1直接结合。IL-1β+AF+anti-miR-149-5p组软骨细胞上清液中IL-6(5.84±0.58比2.71±0.26，q＝20.382，P<0.05)、IFN-γ(46.22±4.31比13.98±1.37，q＝27.042，P<0.05)和TNF-α(25.32±2.51比6.77±0.67，q＝29.011，P<0.05)含量高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组，细胞凋亡率(21.41±2.33比9.68±0.96，q＝17.964，P<0.05)高于IL-1β+AF+anti-miR-NC组。
结论芍药内酯苷通过调控miR-149-5p/WISP1通路对IL-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用。
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