铁皮石斛多糖提取及对羟基自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用

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以酶解超声提取法提取铁皮石斛多糖,通过对料液比、超声时间、复合酶浓度的单因素和正交实验,确定铁皮石斛多糖的最佳提取条件;以高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)对铁皮石斛多糖进行组成成分分析;以香豆素-3-羧酸 (Coumarin-3-carboxylic acid,CCA)荧光法测定铁皮石斛多糖的羟基自由基清除能力;以噻唑蓝(methyl thiazoly1 tetrazolium,MTT)实验和细胞流式实验研究铁皮石斛多糖提取物对SH-SY5Y细胞的保护作用。结果表明,最优铁皮石斛多糖提取条件为:料液比1:100(g/mL)、超声时间2 h、复合酶(纤维素酶和果胶酶1:1等量混合)加酶量为50%(复合酶质量:铁皮石斛质量),最优提取条件下铁皮石斛多糖的得率为25.69%,其主要单糖组分为甘露糖和葡萄糖。在浓度为20~80 μg/mL范围内铁皮石斛多糖提取物能有效清除Cu2+催化H2O2产生的羟基自由基并有效抑制SH-SY5Y细胞的凋亡(凋亡率从56.97%下降到17.97%),且其作用效果成浓度依赖性。因此,铁皮石斛多糖可通过清除羟基自由从而抑制Cu2+催化H2O2产生的羟基自由基诱导的SH-SY5Y细胞凋亡。
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