观察探讨外源性轴突导向因子netrin-1对早期糖尿病(DM)大鼠血视网膜屏障(BRB)的影响及可能的作用机制。
方法健康雄性Sprague-Dawley大鼠80只，采用随机数字表法将其分为正常对照组、DM＋平衡盐溶液(BSS)组、DM＋netrin-1低剂量组、DM＋netrin-1高剂量组，每组均为20只大鼠。链脲佐菌素腹腔注射诱导DM模型。DM 3个月时，DM＋netrin-1低剂量组、DM＋netrin-1高剂量组大鼠玻璃体腔分别注射10、100 mg/ml的netrin-1 5 μl；DM＋BSS组大鼠玻璃体腔注射等体积BSS。高糖高脂饲养1个月后处死所有大鼠，摘除眼球。每组随机选取5只大鼠行苏木精-伊红染色观察各组大鼠视网膜微血管改变；免疫组织化学染色检测视网膜闭合蛋白(occludin)的表达以及荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)观察occludin mRNA的表达；伊凡思蓝(EB)渗漏试验观察大鼠视网膜微血管结构改变和渗漏。独立样本t检验对两组间指标进行统计学分析。多组间比较采用单因素方差分析。
结果光学显微镜观察发现，DM＋BSS组大鼠视网膜神经节细胞层水肿，排列紊乱，视网膜微血管扩张，结构异常；DM＋netrin-1高剂量组大鼠视网膜神经节细胞水肿减轻，微血管扩张程度减轻。免疫组织化学染色结果显示，DM＋netrin-1低剂量组、DM＋netrin-1高剂量组大鼠视网膜棕黄色颗粒染色范围扩大，颜色加深。RT-PCR检测结果显示，与正常对照组大鼠视网膜中occludin mRNA表达比较，其余各组大鼠视网膜中occludin mRNA表达减少，差异有统计学意义(P<0.05)。DM＋BSS组、DM＋netrin-1低剂量组、DM＋netrin-1高剂量组间大鼠视网膜平均积分吸光度[A，旧称光密度(OD)]值(IA值)比较，差异有统计学意义(F＝177.13, P＝0.00)，且DM＋netrin-1高剂量组大鼠视网膜occludin表达较DM＋netrin-1低剂量组高。DM＋BSS组大鼠视网膜IA值与DM＋netrin-1低剂量组比较，差异有统计学意义(t＝－13.98，P＝0.00)；DM＋netrin-1高剂量组大鼠视网膜IA值与正常对照组比较，差异有统计学意义(t＝12.87, P＝0.00)。EB渗漏试验结果显示，DM＋BSS组、DM＋netrin-1低剂量、DM＋netrin-1高剂量组间大鼠视网膜EB渗漏量比较，差异有统计意义(F＝179.69, P＝0.00)；DM＋netrin-1低剂量组大鼠视网膜EB渗漏量与DM＋netrin-1高剂量组比较，差异有统计学意义(t＝12.73, P＝0.00)。
结论玻璃体腔注射外源性netrin-1对早期DM大鼠BRB有保护作用；这种保护作用可能是通过抑制视网膜occludin的减少实现。