【摘 要】
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一种来源于豌豆的白蛋白 (PA)对多种昆虫具有明显的毒性作用 .为了进一步研究其抗虫机理 ,采用基因工程的方法富集蛋白质 .将该白蛋白基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZ
【机 构】
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暨南大学生命科学技术学院生物工程学系,华南理工大学生物工程系
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一种来源于豌豆的白蛋白 (PA)对多种昆虫具有明显的毒性作用 .为了进一步研究其抗虫机理 ,采用基因工程的方法富集蛋白质 .将该白蛋白基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA .并导入毕赤酵母菌GS115中表达 .通过PCR和Northern印迹法分析基因的整合及转录 ,对工程菌进行发酵 ,采用两步培养 :第一步富集菌体 ,第二步甲醇诱导工程菌表达重组蛋白 ,并分泌到培养基中 .经过超滤和HPLC分离 ,重组抗虫白蛋白得率约 10mg L .重组蛋白对象鼻虫敏感株表现出很强的毒力 ,半致死剂量LC50 为 4 7,与直接纯化于豌豆种子的白蛋白毒力一致 ,而对象鼻虫抗性株无明显毒力 .
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