【摘 要】
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为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2) ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTv2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将
【机 构】
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江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室/国家兽用生物制品工程技术研究中心,江苏南京210014南京农业大学动物医学院,江苏南京210095;江苏省农业科学院兽医研究所/农业部
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为了构建猪输血传播病毒2型(TTV2) ORF1基因部分片段的原核表达载体,进行原核表达,并利用重组蛋白质制备猪TTv2的多克隆抗体,采用PCR方法扩增出猪TTV2 ORF1基因的部分片段,将其克隆至原核表达载体pcoldI中,构建原核表达质粒pcold-gl,然后转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达.表达产物通过镍离子亲和层析柱进行纯化,用Western blot进行鉴定.将纯化的重组蛋白质免疫新西兰大白兔制备猪TTV2多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性,间接ELISA检测抗体效价.PCR扩增获得大小为1 227 bp的片段,重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确；重组蛋白质分子量为5.2× 104,主要以包涵体形式存在,纯化后纯度可达95％以上,具有较好的抗原性；制备的多克隆抗体特异性高,抗体效价达1:12800.重组蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达,为建立TTV2间接ELISA检测方法提供了优质的包被抗原.
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