甲硒氨酸耐热邻苯二酚2,3双加氧酶的高表达和分离纯化

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甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上90年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法,该法得以实施的首要一步是获得硒取代(硫)的高纯蛋白质,通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚2,3双加氧酶(简称TCTD)的基因PHEB克隆至表达载体pRSET,得到了高表达质粒pRSET-PHEB,转入Met缺陷的菌株B834DE3.通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的TCTD.经质谱测定发现TCTD的所有7个甲硫氨酸都被甲硒氨酸所替代,这为Se-Met多波长反常散射法研究TCTD的晶体结构打下了基础.
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