【摘 要】
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目的 观察体外血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡及BMSCs凋亡过程中Smac基因表达变化,进一步探索BMSCs凋亡机制.方法 用密度梯度离心和差异贴壁相结合法分离BMSCs
【机 构】
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江苏省常州市戚墅堰区人民医院儿科,南京医科大学第一附属医院
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目的 观察体外血清剥夺诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)凋亡及BMSCs凋亡过程中Smac基因表达变化,进一步探索BMSCs凋亡机制.方法 用密度梯度离心和差异贴壁相结合法分离BMSCs,体外培养、扩增.流式细胞术对培养的BMSCs 进行免疫表型鉴定.BMSCs体外血清剥夺培养0 h(正常对照组)、24 h、48 h,用Annexin Ⅴ-FITC和碘化丙啶(PI)双标记行流式细胞术凋亡检测.通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)生成cDNA,以荧光定量PCR检测分析Smac mRNA的丰度.结果 体外培养第5代BMSCs流式细胞术免疫表型鉴定结果符合BMSCs特点.与0 h比较,血清剥夺24、48 h后, BMSCs发生显著凋亡,各组比较有统计学差异(F =170.96 P＜0.01),且24 h点早期凋亡百分率达到(32.99±2.52)%.同时荧光定量PCR检测显示24 h点Smac mRNA表达与正常对照组相比显著升高(t=2.814 P＜0.05).结论 血清剥夺能诱导BMSCs凋亡,被诱导凋亡的BMSCs中Smac基因转录增加.
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