靶向同源盒基因A7的小干扰RNA筛选及功能鉴定

来源 :肿瘤研究与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abcdewwy
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目的 体外设计、合成及筛选高效沉默同源盒基因A7 (HOXA7)表达的小干扰RNA(siRNA),并研究沉默HOXA7对人类肺腺癌细胞株LETP-a-2增殖、凋亡的影响.方法 设计、合成三对针对HOXA7基因的siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3)和一对阴性对照(siRNAnc),分别用阳离子脂质体介导转染LETP-a-2细胞.实验分6组:细胞对照组、脂质体对照组、siRNAnc组、siRNA1组、siRNA2组、siRNA 3组,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测各组HOXA7 mRNA和蛋白表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术分别检测沉默HOXA7后LETP-a-2细胞增殖、凋亡情况.结果 siRNA成功转染LETP-a-2细胞,三对siRNA均能有效沉默HOXA7表达,其中以siRNA2沉默HOXA7的效果最佳,在mRNA和蛋白水平沉默率分别为(57.344±4.743)%和(52.219±0.550)%;三对siRNA沉默HOXA7后均能抑制LETP-a-2细胞增殖并促进其凋亡,其中以siRNA2组效果最明显,48 h细胞增殖抑制率可达(48.144±4.992)%,凋亡率达(26.613±0.612)%.结论 筛选出高效沉默HOXA7的siRNA2能有效抑制LETP-a-2细胞增殖并促进其凋亡,提示HOXA7可能成为肿瘤基因治疗的新靶点。

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