【摘 要】
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目的 :研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌PC-3细胞株中抑癌基因泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)表达的影响,并探
【机 构】
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重庆医科大学生命科学研究院电镜室,重庆医科大学附属第一医院骨科,
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目的 :研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人前列腺癌PC-3细胞株中抑癌基因泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase L1,UCHL1)表达的影响,并探讨其可能的调节机制。方法 :PC-3细胞株经不同浓度(25、50和100μmol/L)的DHA处理48 h,并设空白对照组。采用FCM法检测各组细胞凋亡率和细胞周期的变化。采用免疫荧光染色法检测UCHL1和DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)在细胞内的蛋白定位及表达量。蛋白质印迹法检测UCHL1、DNMT1、磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)和Akt蛋白的表达;并且以1μmol/L磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)家族抑制剂Wortmanin作为阳性对照,比较分析DHA处理组p-Akt蛋白的表达量。结果 :DHA能明显诱导PC-3细胞凋亡,并使细胞停滞在G2/M期,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。DHA处理组中DNMT1蛋白由细胞核转移到细胞质,与空白对照组比较,DNMT1蛋白在细胞核与细胞质中总的表达水平明显下调(P<0.05);而UCHL1蛋白表达在细胞质内明显上调(P<0.05)。与空白对照组比较,DHA处理组与阳性对照组的UCHL1蛋白表达均上调(P<0.05),DNMT1表达水平均下调(P<0.05),p-Akt蛋白表达水平下调(P<0.05),而Akt蛋白表达量无明显变化(P>0.05);其中,高浓度DHA处理组的p-Akt蛋白表达下调更为显著,更接近于阳性对照组。结论 :DHA能够抑制DNMT1的表达,恢复抑癌基因UCHL1的表达,从而诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡,阻滞细胞周期进程;推测其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的活性有关。
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