【摘 要】
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目的 探索龙鳖胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)迁移和Hippo-Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)信号通路的影响.方法 通过全骨
【机 构】
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广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)骨科,广东广州510120;广东省中医药科学院骨与关节退变及损伤研究团队,广东广州510120;广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院)骨科,广东广州510
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目的 探索龙鳖胶囊含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)迁移和Hippo-Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)信号通路的影响.方法 通过全骨髓贴壁法提取大鼠原代BMSCs,取第3代细胞,采用流式细胞术检测CD29、CD44、CD45和CD90的表达情况;利用成脂和成骨分化诱导剂对BMSCs进行诱导,成骨分化后采用茜素红染色观察形成矿化结节的情况,成脂分化后采用油红O染色观察脂滴的形成情况.SD大鼠ig龙鳖胶囊(0.625 g/kg),2次/d,连续7d,腹主动脉取血,制备含药血清;使用YAP抑制剂Verteporfin(2、5μmol/L)或5.0％含药血清处理BMSCs,采用划痕实验和Transwell迁移实验检测24 h后细胞的迁移情况.给予2.5％、5.0％含药血清处理BMSCs 24 h,采用Western blotting法检测Hippo-YAP信号通路相关蛋白的表达情况.结果 BMSCs分离培养后正常贴壁生长,呈长梭形;经成骨诱导茜素红染色后,可见大量被染成红色的矿化结节;经成脂诱导油红O染色后,可见大量被染成橘红色的脂滴;流式结果显示,表达CD29的阳性率为99.68％,表达CD44的阳性率为99.03％,表达CD45的阳性率为0.14％,CD90的阳性率为95.38％,符合BMSCs的特征.与对照组比较,Verteporfin显著抑制BMSCs迁移(P＜0.05、0.01、0.001),5.0％含药血清显著促进BMSCs迁移(P＜0.05);与等剂量的Verteporfin组比较,5.0％含药血清+Verteporfin组BMSCs迁移率明显上升(P＜0.01、0.001).2.5％、5.0％含药血清均显著下调大型肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor homolog 2,LATS2)蛋白表达水平(P＜0.05),上调YAP及其下游蛋白结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达水平(P＜0.01).结论 龙鳖胶囊含药血清具有促进BMSCs迁移的作用,其作用机制可能与调控Hippo-YAP信号通路相关.
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