建立并应用小鼠胚胎干细胞实验（mEST)模型与人胚胎干细胞实验（hEST）模型评价邻苯二甲酸二（2-乙基己基)酯(DEHP)的胚胎发育毒性。

参照欧洲替代方法研究中心（ECVAM）的标准操作方法，建立mEST、hEST模型，并选用ECVAM推荐的已知强胚胎发育毒性物质5-氟尿嘧啶（5-FU）和无胚胎毒性物质青霉素G (PN-G）进行模型验证，在模型验证有效的基础上，以15.6、31.2、62.5、125.0、250.0、500.0、1 000.0 μg/ml浓度的DEHP分别染毒小鼠胚胎干细胞D3 (mESC-D3)、Balb/c小鼠成纤维细胞3T3(3T3）及人胚胎干细胞H9(hESC-H9) 7 d，采用CCK-8法检测不同浓度DEHP染毒后mESC-D3、3T3及hESC-H9细胞存活百分数和半数增殖抑制浓度（IC₅₀）。根据细胞毒性实验结果，使用15.6、31.2、62.5、125.0、250.0、500.0 μg/ml浓度的DEHP分别处理分化的mESC-D3、hESC-H9细胞10 d，采用Real-time PCR检测不同浓度DEHP作用下，分化标志基因心肌细胞肌球蛋白重链(α-MHC)的表达情况，拟合效应曲线，得出半数分化抑制浓度(ID₅₀)。并将ID₅₀、IC₅₀代入线性判别函数公式进行计算与比较。

细胞生长状态良好，免疫荧光染色可见未分化hESC-H9细胞高表达、干性关键转录因子八聚体结合转录因子(OCT4)、阶段特异性胚胎抗原（SSEA-4)及肿瘤排斥抗原(Tra-1-60)，细胞处于未分化状态。拟胚体大小均一、形态一致，可重复性高。采用ECVAM推荐已知发育毒性物质（5-FU和PN-G）对模型进行验证，所建模型有效，可用于受试物胚胎发育毒性的评价。DEHP对mESC-D3的IC₅₀为210.0 μg/ml、ID₅₀为246.8 μg/ml及对3T3的IC₅₀为197.3 μg/ml，代入线性判别函数公式得出函数Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ值分别为7.78、7.58、-7.79，因Ⅰ>Ⅱ>Ⅲ，mEST模型评价DEHP为无胚胎发育毒性。DEHP对hESC-H9的IC₅₀为184.8 μg/ml，ID₅₀为84.3 μg/ml及对3T3的IC₅0为195.4 μg/ml，代入线性判别函数公式得出函数Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ值分别为3.21、5.77、-6.46，因Ⅱ>Ⅰ>Ⅲ，hEST模型评价DEHP为弱胚胎发育毒性。

hEST模型相对于mEST模型在评价受试物的弱胚胎发育毒性方面可能更为敏感。