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[摘 要]目的 建立疣清颗粒质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对制剂中香附、白芍进行定性鉴别；对组方中有效成分黄芪甲苷用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（RP-HPLC-ELSD）进行定量分析。结果 薄层色谱中斑点清晰，易于识别；RP-HPLC-ELSD法精密度、重现性良好，黄芪甲苷在1.032～5.16μg范围内具有较好的线性关系，平均加样回收率为99.051 6%，RSD=1.05%。结论 在本研究基础上制定的质量标准可以控制本品的内在质量，方法是可行的。
[关键词]疣清颗粒 质量控制
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0000-01
疣清颗粒由黄芪、白芍、香附、薏苡仁等药物组成，具有清热解毒、托毒排脓、敛疮生肌功效，主要用于治疗尖锐湿疣等皮肤病。本试验采用薄层色谱法对方中黄芪、香附、白芍进行薄层鉴别。黄芪是方中主药，因此，选定黄芪甲苷为该制剂的含量测定项目，采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（RP-HPLC-ELSD）进行检测，以制定该制剂的质量控制标准。
一、仪器、试剂与药品
日本岛津HW-2000高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）；TD5A低速台式离心机（长沙湘仪离心机有限公司）；AY220电子天平（岛津）；LichropherC18（5μm，4.6mmID×15cm）色谱柱（淮阴汉邦科技有限公司；硅胶G（青岛海洋化工厂）。
黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号为110781-200511）。黄芪、白芍、薏苡仁、香附等药材购自辽宁省药材公司，经鉴定，符合2005年版《中华人民共和国药典》（一部）有关标准。疣清颗粒样品自制，批号为060611，060613，060615。甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。
二、方法与结果
1、薄层色谱鉴别
1）白芍
取本品3g，加乙醇10mL，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作為供试品溶液。另取白芍对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取除白芍外的其它处方量药材，按制备工艺制成缺白芍的阴性样品，取适量阴性样品同法制成缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-丙酮（8∶4∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2）香附
取本品4.6g，加温水（50℃）30mL，超声处理10min，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，合并乙醚液，挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另按处方及工艺分别制备不含香附的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲苯（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，放置1h，斑点渐变为橙红色，而阴性对照液在相应位置上无此斑点。
2、黄芪甲苷的含量测定
1）色谱条件
色谱柱为LichrospherC18（5μm，4.6mmID×15cm，淮阴汉邦科技有限公司）；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：1mL/min；柱温：25℃。ELSD检测温度：92℃；气体流量2.24L/min。
2）对照品溶液的制备和线性关系的考察
精密称取黄芪甲苷对照品5.16mg置于10mL容量瓶中并定容至刻度，得到浓度为0.516mg/mL的对照品溶液。分别取对照品溶液，用甲醇稀释成0.1032、0.2064、0.3096、0.4128、0.516mg/mL黄芪甲苷溶液，按上述色谱条件测定。以黄芪甲苷的进样量常用对数为纵坐标，黄芪甲苷的峰面积常用对数为横坐标，回归得标准曲线：logA=0.779133logC+7.380524，r=0.999973。结果表明，黄芪甲苷的进样量在1.032～5.16μg范围内，与其峰面积有良好的线性关系。
3）供试品溶液的制备与测定
取疣清颗粒2.5g，混匀，精密称定，置于锥形瓶中，加水50mL，浸泡30min，超声波处理30min，放冷，用水饱和正丁醇萃取3次（40、40、30mL），分取正丁醇层置于上述分液漏斗中，加入40%氨试液洗涤2次，每次40mL，弃去氨试液，分取正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加蒸馏水3～5mL溶解，放冷，通过D101大孔树脂柱（内径1.5cm，长12cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇转移并定容至5mL容量瓶中。从该溶液中取一部分用0.45μm微孔过滤器过滤后即得疣清颗粒供试品溶液。取上述供试品溶液10μL注入液相色谱仪，测定峰面积。
4）精密度考察
按选定的黄芪甲苷HPLC测定条件，精密吸取同一对照品溶液，进样10μL，重复进样6次，测定黄芪甲苷峰面积，结果RSD=1.19%（n=6）。
5）重复性试验
精确称取疣清颗粒2.5g，共6份，按上述供试品溶液的制备方法制备，各进样10μL，每份样品进2针，测定黄芪甲苷峰面积，RSD=0.92%（n=6）。
6）稳定性考察
将同一样品溶液，在0、2、8、12、16、20h分别进样10μL，记录峰面积，结果表明，峰面积的RSD=0.71%（n=6）。说明供试品溶液在20h内是稳定的。
7）加样回收率试验
取已测知含量的样品适量，共6份，分别加入等同于样品中黄芪甲苷含量80%、100%、120%的黄芪甲苷对照品，按“2.2.3”项下同法测定，用外标两点法计算含量。
8）含量测定
取疣清颗粒3批样品（自制，批号为060611、060613、060615），按供试品溶液制备方法制备样品液，按上述色谱条件进行测定，进样10μL，每份重复进样2次，测定疣清颗粒中黄芪甲苷含量。
三、讨论
疣清颗粒中白芍、香附薄层鉴别与阴性对照品相比无干扰，且重现性较好。香附薄层色谱鉴别参照有关文献报道，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，放置片刻后斑点显现不明显，根据试验结果，需放置1h后斑点渐显，且在较长时间内斑点明显，不褪色。黄芪甲苷含量测定方法已报道有比色法、薄层扫描法、HPLC法等，其中HPLC法大多用紫外检测器于203nm处检测。在预试验中，曾使用紫外检测器检测，结果干扰较大，基线漂移严重，测定结果不稳定，而改用RP-HPLC-ELSD进行检测，空白无干扰，结果准确可靠，重现性好，适合于疣清颗粒的质量控制。
参考文献
[1] 宋永贵，冯颖，洪星.疣清颗粒质量标准研究，论文网，2011.07.
[关键词]疣清颗粒 质量控制
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）01-0000-01
疣清颗粒由黄芪、白芍、香附、薏苡仁等药物组成，具有清热解毒、托毒排脓、敛疮生肌功效，主要用于治疗尖锐湿疣等皮肤病。本试验采用薄层色谱法对方中黄芪、香附、白芍进行薄层鉴别。黄芪是方中主药，因此，选定黄芪甲苷为该制剂的含量测定项目，采用反相高效液相色谱-蒸发光散射检测法（RP-HPLC-ELSD）进行检测，以制定该制剂的质量控制标准。
一、仪器、试剂与药品
日本岛津HW-2000高效液相色谱仪（日本岛津公司）；KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）；TD5A低速台式离心机（长沙湘仪离心机有限公司）；AY220电子天平（岛津）；LichropherC18（5μm，4.6mmID×15cm）色谱柱（淮阴汉邦科技有限公司；硅胶G（青岛海洋化工厂）。
黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号为110781-200511）。黄芪、白芍、薏苡仁、香附等药材购自辽宁省药材公司，经鉴定，符合2005年版《中华人民共和国药典》（一部）有关标准。疣清颗粒样品自制，批号为060611，060613，060615。甲醇为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。
二、方法与结果
1、薄层色谱鉴别
1）白芍
取本品3g，加乙醇10mL，超声处理10min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作為供试品溶液。另取白芍对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取除白芍外的其它处方量药材，按制备工艺制成缺白芍的阴性样品，取适量阴性样品同法制成缺白芍的阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-丙酮（8∶4∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。
2）香附
取本品4.6g，加温水（50℃）30mL，超声处理10min，水溶液用乙醚提取2次，每次30mL，合并乙醚液，挥去乙醚，残渣加醋酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。另取香附对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。另按处方及工艺分别制备不含香附的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲苯（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，放置1h，斑点渐变为橙红色，而阴性对照液在相应位置上无此斑点。
2、黄芪甲苷的含量测定
1）色谱条件
色谱柱为LichrospherC18（5μm，4.6mmID×15cm，淮阴汉邦科技有限公司）；流动相：甲醇-水（80∶20）；流速：1mL/min；柱温：25℃。ELSD检测温度：92℃；气体流量2.24L/min。
2）对照品溶液的制备和线性关系的考察
精密称取黄芪甲苷对照品5.16mg置于10mL容量瓶中并定容至刻度，得到浓度为0.516mg/mL的对照品溶液。分别取对照品溶液，用甲醇稀释成0.1032、0.2064、0.3096、0.4128、0.516mg/mL黄芪甲苷溶液，按上述色谱条件测定。以黄芪甲苷的进样量常用对数为纵坐标，黄芪甲苷的峰面积常用对数为横坐标，回归得标准曲线：logA=0.779133logC+7.380524，r=0.999973。结果表明，黄芪甲苷的进样量在1.032～5.16μg范围内，与其峰面积有良好的线性关系。
3）供试品溶液的制备与测定
取疣清颗粒2.5g，混匀，精密称定，置于锥形瓶中，加水50mL，浸泡30min，超声波处理30min，放冷，用水饱和正丁醇萃取3次（40、40、30mL），分取正丁醇层置于上述分液漏斗中，加入40%氨试液洗涤2次，每次40mL，弃去氨试液，分取正丁醇提取液，水浴蒸干，残渣加蒸馏水3～5mL溶解，放冷，通过D101大孔树脂柱（内径1.5cm，长12cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30mL洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇转移并定容至5mL容量瓶中。从该溶液中取一部分用0.45μm微孔过滤器过滤后即得疣清颗粒供试品溶液。取上述供试品溶液10μL注入液相色谱仪，测定峰面积。
4）精密度考察
按选定的黄芪甲苷HPLC测定条件，精密吸取同一对照品溶液，进样10μL，重复进样6次，测定黄芪甲苷峰面积，结果RSD=1.19%（n=6）。
5）重复性试验
精确称取疣清颗粒2.5g，共6份，按上述供试品溶液的制备方法制备，各进样10μL，每份样品进2针，测定黄芪甲苷峰面积，RSD=0.92%（n=6）。
6）稳定性考察
将同一样品溶液，在0、2、8、12、16、20h分别进样10μL，记录峰面积，结果表明，峰面积的RSD=0.71%（n=6）。说明供试品溶液在20h内是稳定的。
7）加样回收率试验
取已测知含量的样品适量，共6份，分别加入等同于样品中黄芪甲苷含量80%、100%、120%的黄芪甲苷对照品，按“2.2.3”项下同法测定，用外标两点法计算含量。
8）含量测定
取疣清颗粒3批样品（自制，批号为060611、060613、060615），按供试品溶液制备方法制备样品液，按上述色谱条件进行测定，进样10μL，每份重复进样2次，测定疣清颗粒中黄芪甲苷含量。
三、讨论
疣清颗粒中白芍、香附薄层鉴别与阴性对照品相比无干扰，且重现性较好。香附薄层色谱鉴别参照有关文献报道，喷以2，4-二硝基苯肼乙醇试液，放置片刻后斑点显现不明显，根据试验结果，需放置1h后斑点渐显，且在较长时间内斑点明显，不褪色。黄芪甲苷含量测定方法已报道有比色法、薄层扫描法、HPLC法等，其中HPLC法大多用紫外检测器于203nm处检测。在预试验中，曾使用紫外检测器检测，结果干扰较大，基线漂移严重，测定结果不稳定，而改用RP-HPLC-ELSD进行检测，空白无干扰，结果准确可靠，重现性好，适合于疣清颗粒的质量控制。
参考文献
[1] 宋永贵，冯颖，洪星.疣清颗粒质量标准研究，论文网，2011.07.