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目的:构建大鼠生长阻滞及DNA损伤诱导基因45(growth arrest and DNA-damage-inducible gene 45,Gadd45)β/γ启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,并观察在大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cells,GMCs)中过表达激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)后分别对大鼠Gadd45β/γ基因启动活性的影响.同时筛选其可能的ATF3结合位点.方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠Gadd45β基因启动子全长(-1 105 ～ +236 nt)和Gadd45γ基因启动子全长(-913～+72nt)分别插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,获得Gadd45β/γ基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-Gadd45β/γ-FL),再将pGL3-Gadd45β/γ-FL分别与课题组前期构建的大鼠野生型ATF3过表达质粒(pIRES2/ATF3)共转染GMCs,检测其荧光素酶活性,以确定ATF3对Gadd45β/γ基因的启动作用.另用生物信息学软件预测Gadd45β/γ基因启动子上ATF3潜在的结合位点,并据此构建4个Gadd45β和3个Gadd45γ基因启动子截短片段的荧光素酶报告质粒.将Gadd45β/γ基因启动子全长和各截短片段的荧光素酶报告质粒与pIRES2/ATF3共转染GMCs,再行荧光素酶活性测定,以筛选ATF3的结合位点.结果:菌液PCR及核酸测序证实,大鼠Gadd45β/-γ基因启动子(全长和截短)的荧光素酶报告质粒均构建成功.将pGL3-Gadd45β/γ-FL分别和pIRES2/ATF3共转染GMCs发现,Gadd45β/γ基因启动子活性均显著增加.而将Gadd45β启动子全长及4个截短质粒分别与pIRES2/ATF3共转染GMCs后显示,pGL3-Gadd45β-4的启动活性显著低于pGL3-Gadd45β-FL、pGL3-Gadd45β-1、pGL3-Gadd45β-2和pGL3-Gadd45β-3.提示ATF3可能结合在Gadd45β基因启动子的(-146～+23 nt)区域.同样,将Gadd45γ启动子全长及3个截短质粒分别与pIRES2/ATF3共转染GMCs后显示,pGL3-Gadd45γ-2、pGL3-Gadd45γ-3的启动活性显著低于pGL3-Gadd45γ-FL和pGL3-Gadd45γ-1.提示ATF3可能结合在Gadd45γ基因启动子的(-456～-61 nt)区域,且这段区域可能包含1个以上ATF3结合位点.结论:成功构建了大鼠Gadd45β/γ基因启动子全长及各截短片段荧光素酶报告质粒,并初步确定了ATF3在Gadd45β/γ基因启动子上的结合区域.