黄芪对被动吸烟小鼠肺部治疗作用的研究

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  摘 要:目的:探究内蒙黄芪对被动吸烟小鼠肺部的治疗作用,分析并确认黄芪在被动吸烟方面的药用价值。方法:将内蒙黄芪制成高、中、低浓度的溶液给被动吸烟小鼠灌服,通过测定小鼠肺部超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和白细胞介素(IL-6)的活力,观察3种剂量的黄芪溶液对小鼠肺部的治疗效果。结果:致损模型组与高、中、低实验组比较:SOD指标,黄芪中剂量、低剂量组与致损模型组具有极显著性差异(P<0.01);GSH-PX指标,黄芪高剂量、中剂量组与致损模型组具有极显著性差异(P<0.01),低剂量组与致损模型组具有显著性差异(P<0.05);IL-6指标中,黄芪高剂量、中剂量组与致损模型组具有极显著性差异(P<0.01),低剂量组与致损模型组具有显著性差异(P<0.05)。结论:黄芪对被动吸烟小鼠的肺部有一定的治疗效果,其中以中剂量效果最好。
  关键词:内蒙黄芪;被动吸烟;SOD;GSH-PX;IL-6
  中图分类号 R285 文献标识码 A 文章编号 1007-7731(2019)21-0045-03
  Abstract:Objective:In this paper,the therapeutic effect of Astragalus membranaceus on the lung of passive smoking mice was explored,and the medicinal value of Astragalus membranaceus in passive smoking was analyzed and confirmed.Method:High,medium and low concentrations of Astragalus membranaceus were prepared and administrated to the passive smoking mice.The lung superoxide dismutase (SOD),glutathione peroxidase (GSH-PX) and interleukin (IL-6) activity of the mice were measured to observe the therapeutic effect of the three doses of Astragalus membranaceus solution on the lung of the mice.Results:Comparison of SOD index between the model group and the high,medium and low experimental groups: there were significant differences in SOD index between the model group and the medium dose and low dose groups of Astragalus membranaceus (P<0.01).The GSH-PX index of Astragalus membranaceus was significantly different between the high-dose group and the medium-dose group and the lesion model group(P<0.01),while there were significant differences between the low-dose group and the lesion model group (P<0.05).Among the IL-6 indexes,there were extremely significant differences between the high-dose and medium-dose groups of Astragalus membranaceus and the lesion model group (P<0.01),and significant differences between the low-dose group and the lesion model group (P<0.05).Conclusion radix astragali has certain therapeutic effect on the lung of passive smoking mice.Conclusion:Astragalus can produce certain therapeutic effect on the lung of passive smoking mice.
  Key words:Astragalus membranaceus;Passive smoking;SOD;GSH-PX;IL–6
  煙草燃烧后的烟雾中含有多种化学物质,包含很多对机体不利的物质,其中有30多种是致癌物质。日常生活中,部分人不直接吸烟,而是与吸烟人群处于同一环境中,在被动吸入一定量的香烟烟雾后,即为被动吸烟。被动吸烟使人们的身体健康遭受影响,其与心脑血管病、肺癌等有关,但被动吸烟致病的病理、生理机制还有待进一步研究[1]。
  内蒙黄芪(Astragalus membranaceus),在药典中被认定作为正品药用[2]。《本草逢原》亦载:“黄耆,能补五脏诸虚,治脉弦自汗,泻阴火,去肺热,无汗则发,有汗则止,入肺而固表虚自汗,入脾而托已溃痈疡。”现代药理研究证实,黄芪在抗衰老、杀菌等方面均具有良好的作用。其作用机制可能是使网状内皮系统吞噬作用得到强化,使神经中枢突触兴奋,增强抵抗能力,消除氧自由基,能起到保护脂质的作用,减少自由基对心肌和肺细胞的损害,保障细胞正常运作,改善微循环。此外,黄芪中富含微量元素硒,具有良好的抗癌作用[3]。   本研究通过设计实验构建被动吸烟小鼠病理模型,测定在烟雾的条件下小鼠肺部的SOD、GSH-PX和IL-6浓度变化,进而探究黄芪对被动吸烟者肺部疾病的治疗作用,及最佳治疗浓度,为黄芪对被动吸烟后肺部疾病的治疗作用提供科学数据。
  1 实验材料
  1.1 实验动物 昆明种小鼠96只,雄性,体重18~20g,由哈尔滨医科大学实验动物学部提供。
  1.2 仪器 BSM-120.4卓精电子分析天平(北京中金凯技术有限公司);4000Lex光照箱(青岛聚创环保设备有限公司);UV1700紫外分光光度计(杭州微米派科技有限公司);PDZ5-2100离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司);自制熏烟箱[4],(制作尺寸大小为80cm×60cm×40cm的长方体玻璃容器,在玻璃容器四周及上部各开1个直径为1.5cm的换气孔,便于后续熏烟的换气。在玻璃容器一端的换气孔上接入手动抽气泵,将香烟固定在换气口处的手动抽气泵上,手动拉伸拉杆将烟雾释放到玻璃容器内,模仿人类吸烟。容器内温度可由外部环境温度控制,控制温度为25℃左右。
  1.3 试剂 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒(南京建成生物工程研究所);小鼠白细胞介素6(IL-6)酶联免疫试剂盒(黄石市爱恩斯生物科技有限公司);核黄素(Vb)(上海化学试剂公司);蛋氨酸(Met)(上海化学试剂公司);四氮唑兰(NBT)(上海前进化学试剂厂);抗坏血酸(Vc)(广东西陇化工厂);氯仿(CHCl3)(广东西陇化工厂)。pH为7.6的0.03mol/L混合磷酸盐缓冲液;红双喜香烟(上海卷烟厂)。
  1.4 药品 内蒙黄芪(将100g内蒙黄芪浸泡于400mL蒸馏水中78℃水浴1h,倒出浸提液后残渣加200mL蒸馏水浸取40min,过滤,合并后浓缩为30mL,制成黄芪高剂量溶液3.3g/mL,将黄芪高剂量溶液稀释10倍制成黄芪中剂量溶液0.33g/mL,将黄芪高剂量溶液稀释100倍制成黄芪低剂量溶液0.033g/mL。)
  2 实验方法
  2.1 分组 按照随机数字表法把96只小鼠分成空白对照组、致损模型组、黄芪溶液高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组16只。
  2.2 造模 将致损模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量組小鼠按照组别,分装进4个仓鼠笼,同时放进熏烟箱,进行被动吸烟的处理。小鼠每天的熏烟时间固定为下午6时,熏烟量1支/d,然后每2d增加1支香烟,直到增加至6支/d,然后不再增加,共计熏烟时间60d。每支香烟的燃烧时间为5min,每次燃烧2支香烟后等待10min,继续点燃剩余的香烟,待全部燃烧完后让小鼠在熏烟箱中放置15~20min,取出小鼠归笼[5]。
  2.3 给药 空白对照组,自然生长;致损模型组,灌胃蒸馏水0.5mL/只,1次/d;高剂量实验组,灌胃高剂量黄芪溶液0.5mL/只,1次/d;中剂量实验组,灌胃中剂量黄芪溶液0.5mL/次,1次/d;低剂量实验组,灌胃低剂量黄芪溶液0.5mL/次,1次/d;共计灌胃时间60d,与熏烟时间同步,中午进行灌胃处理,下午进行熏烟处理。
  2.4 指标测定 将每组的16只小鼠按随机数法分为2个小组,每小组8只。编号记为1~8号,另外8只编号为9~16号。取1~8号小鼠肺叶做SOD检测,9~16号同时做GSH-PX、IL-6检测。
  2.4.1 SOD检测 将1~8号小鼠处死,取出肺叶称量后在研磨器中研磨利用四氮唑蓝法[6,7]于分光光度计下测量560nm所对应的波长。
  2.4.2 GSH-PX检测 将9~16号小鼠处死,取出肺叶分离为左右2个部分。将左肺用0.9%NaCl溶液漂洗后取出称量,加入9倍体积的0.86%生理盐水。将肺组织倒入组织匀浆器中,使肺组织匀浆化。3000r/min离心10~15min,弃沉淀得上清液,然后检测GSH-PX的活力[8]。
  2.4.3 IL-6检测 将9~16号小鼠右肺称取重量。加入一定量的PBS,pH7.4。液氮保存备用。取出标本融化后,加入一定量的PBS,pH7.4,用组织匀浆器将样品匀浆充分。2000~3000r/min离心20min,弃沉淀收集上清液。利用白细胞介素-6酶联免疫试剂盒检测样品的浓度[9]。
  2.5 统计方法 本实验数值采用平均值±标准差([x±s])的方法表示,用SPSS 17.0进行统计分析。不同实验组之间的差异利用t检验分析,P<0.05表示存在有显著性差异,P<0.01表示存在有极显著性差异。
  3 结果与分析
  由表1可知,致损模型组与空白组比较,GSH-PX有显著性差异(P<0.05),SOD和IL-6有极显著性差异(P<0.01),故确定小鼠被动吸烟模型造模成功。SOD活力方面,各实验组与致损模型组比较:高剂量实验组,无显著性差异(P>0.05);中剂量实验组和低剂量实验组,具有极显著性差异(P<0.01)。说明黄芪溶液中、低剂量均可增加SOD的活力。GSH-PX活力方面,各实验组与致损模型组比较:高剂量实验组和中剂量组,将有极显著性差异(P<0.01);低剂量实验组,具有显著性差异(P<0.05)。说明黄芪溶液高、中、低剂量均可增加GSH-PX的活力。IL-6浓度方面,各实验组与致损模型组比较:高剂量实验组和中剂量组,具有极显著性差异(P<0.01);低剂量实验组,具有显著性差异(P<0.05)。说明黄芪溶液高、中、低剂量均可增加IL-6的作用效果。黄芪高剂量组与致损模型组对比,SOD无显著性差异,但GSH-PX、IL-6均有极显著性差异;黄芪中剂量组与致损模型组对比,SOD、GSH-PX、IL-6具有极显著性差异;黄芪低剂量组与致损模型组对比,SOD有极显著性差异,GSH-PX、IL-6有显著性差异。由此可知,黄芪中剂量溶液对被动吸烟小鼠的治疗效果较好;其次为低剂量组;高剂量组对GSH-PX、IL-6有作用,而对SOD无作用。   4 讨论
  SOD是生物体内非常重要的抗氧化酶[10],在自然界的生物体中均有分布,其含有重要的生物活性结构,所以在生物体内清除自由基[11]方面具有重要的地位。氧自由基能够对细胞造成损害,而SOD的存在能够消除这种细胞损害,并且对相应的受损位点具有修复作用;GSH-PX是广泛分布于机体的一种重要的过氧化物分解酶[12],与机体的过氧化反应有关,清除因细胞呼吸代谢过程中所产生代谢废物,加快H2O2分解,保护细胞膜的膜脂的免受过氧化物的损害,防止脂质化的产生;IL-6可由多种细胞产生,具有信息传递、参与机体内炎症反应的作用,大量被动吸入烟雾后,受苯并芘、尼古丁、焦油等影响,机体会产生一系列的炎症,降低白细胞的活性能力,使白细胞功能衰弱。
  当机体长时间处于被动吸烟的环境中,机体会一直处于负氧状态,一定时间累计后会产生自由基,而具有细胞毒性,使脂质过氧化,使细胞膜受损,引起一系列的炎症,降低机体白细胞的免疫活性,免疫系统会遭到严重破坏。
  上述测量数据中:在SOD方面,黄芪中剂量和低剂量组可降低被动吸烟小鼠肺部的SOD的水平,提高SOD的活力,从而达到对烟雾损伤的拮抗作用,使机体相对分泌较少活性成分的酶,以便能够抵抗外界的烟雾损害;GSH-PX方面,黄芪的高剂量、中剂量组和低剂量组可增强GSH-PX的生物活性,使脂质的过氧化程度降低,提高机体的抗氧化自由基的活力,为机体抵御损伤提供了更有效的屏障;IL-6方面,黄芪的高剂量、中剂量组和低剂量组有效地抵抗了被动吸烟烟雾对机体的损伤,有效缓解了机体的炎症,从而使机体的免疫能力提高,拮抗炎症反应。
  本次实验结果表明,黄芪中剂量(0.33g/mL)在对烟雾损伤小鼠的治疗作用中所起到的效果最佳,可有效抵抗被动吸烟对肺部带来的损伤,在被动吸烟群体具有很好的应用前景,为后期黄芪用于临床治疗被动吸烟带来的肺损伤提供了一定的实验依据,同时也为药厂和保健品制作相关保护肺损伤的产品提供了新思路。
  参考文献
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  (責编:张宏民)
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