【摘 要】
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目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virus A6，CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备抗CVA6 VP1和VP2兔抗血清。方法逆转录PCR扩增CVA6 VP1和VP2基因片段，整合入表达载体pGEX-6p-1，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达，经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化，纯化后的融合蛋白
【机 构】
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443002 宜昌，三峡大学医学院；430207 武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究一室,430207 武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究一室,430207 武汉生物制品研究所病毒性疫苗研究一室,4302
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目的构建柯萨奇病毒A6型(coxsackie virus A6，CVA6)VP1和VP2基因的原核表达载体，诱导表达重组蛋白，制备抗CVA6 VP1和VP2兔抗血清。
方法逆转录PCR扩增CVA6 VP1和VP2基因片段，整合入表达载体pGEX-6p-1，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达，经过大型SDS-PAGE制备电泳并进行切胶回收纯化，纯化后的融合蛋白GST-VP1和GST-VP2分别免疫家兔，获得兔抗血清。Western blot(WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)鉴定抗体。
结果CVA6 VP1和VP2原核表达载体经PCR、双酶切和测序鉴定正确，获得了高纯度的CVA6 VP1和VP2融合蛋白，WB和IFA鉴定多克隆抗体制备成功。
结论成功构建了CVA6 VP1和VP2原核表达载体，获得了重组的CVA6 VP1和VP2蛋白及其多克隆抗体。
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