【摘 要】
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目的:探讨以肠病毒71(entrovirus 71,EV71)2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法:用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FI
【机 构】
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江苏大学附属人民医院检验科,江苏大学医学院,镇江市疾病预防控制中心
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目的:探讨以肠病毒71(entrovirus 71,EV71)2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法:用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FITC标记的BLOCK-iT Fluorescent Oligo转染RD细胞,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。将化学合成的3个siRNA-2Apro(siRNA-69、294、319)和阴性对照的乱序si-RNA(siRNA-SCS)转染RD细胞,siRNA-2Apro为实验组,siRNA-SCS为阴性对照组,另设模拟转染组,仅用脂质体处理;用EV71分别感染各组RD细胞,观察细胞形态学改变,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测病毒RNA和VP1蛋白。结果:当siRNA浓度为60 nmol/L时转染效率最高,达87%。细胞形态学结果显示,与对照组比较,实验组细胞只发生了轻微的病变。荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,siRNA-2Apro组的病毒RNA和VP1蛋白明显低于对照组(P<0.01)。结论:以EV71 2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制病毒的复制。
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